Utvikling av målretting indusert lokale lesjoner i genomer (TILLING) populasjoner i små korn avlinger av etanol Methanesulfonate mutagenese

Målretting indusert lokale lesjoner i genomer (TILLING) er et kraftig omvendt genetikk verktøy som inkluderer kjemiske mutagenese og deteksjon av sekvens variasjon i mål gener. TILLING er et svært verdifullt funksjonelt Genomics verktøy for gen validering, spesielt i små korn der transformasjon-baserte tilnærminger holder alvorlige begrensninger. Å utvikle en robust mutagenized befolkning er nøkkelen til å bestemme effektiviteten av en TILLING-basert gen validerings studie. En TILLING befolkning med en lav samlet mutasjon frekvens indikerer at en uhensiktsmessig stor befolkning må undersøkes for å finne ønskede mutasjoner, mens en høy arvestoffskadelig konsentrasjon fører til høy dødelighet i befolkningen, noe som fører til en utilstrekkelig antall mutagenized individer. Når en effektiv befolkning er utviklet, er det flere måter å oppdage mutasjoner i et gen av interesse, og valg av plattform avhenger av eksperimentell skala og tilgjengelighet av ressurser. Cel-1-analysen og agarose gel-basert tilnærming for mutant identifisering er praktisk, reproduserbar og en mindre ressurs intensiv plattform. Det er en fordel i at det er enkelt, krever ingen beregningsorientert kunnskap, og det er spesielt egnet for validering av et lite antall gener med grunnleggende laboratorieutstyr. I denne artikkelen er beskrevet metodene for utvikling av en god TILLING befolkning, inkludert utarbeidelse av dosering kurve, mutagenese og vedlikehold av mutant befolkningen, og screening av mutant befolkningen ved hjelp av PCR-baserte cel-1 analysen .