通过CAS9蛋白-gRNA复合物电穿孔直接基因敲除Axolotl脊髓神经干细胞

轴线具有完全再生脊髓的独特能力。这主要是由于脑细胞作为神经干细胞(NSCs)在一生中残留,这些细胞增殖以改造脑管,并在脊髓损伤后分化成丢失的神经元。解读这些 NSC 如何在脊髓损伤后保持多能性并在脊髓损伤时增殖,以改革确切的损伤前结构,从而对哺乳动物脊髓如何再生以及潜在的治疗方案提供有价值的见解。在限定时间内在NSC的特定子集中执行基因敲除,将使得研究这些再生过程背后的分子机制,而不会被发育扰动效应所迷惑。此处描述的是一种使用 CRISPR-Cas9 系统在 axolotl 脊髓 NSC 中执行基因敲除的方法。通过将 CAS9-gRNA 复合物注入脊髓中央管,然后进行电穿孔,目标基因在脊髓特定区域的 NSC 中按所需时间点被敲掉,从而在脊髓 NSC 期间进行分子研究再生。