Reinigung von hochertragreichen extrazellulären Vesikelpräparaten weg vom Virus

Eine der größten Hürden auf dem Gebiet der extrazellulären Vesikelforschung (EV) ist heute die Fähigkeit, gereinigte EV-Präparate in einer Virusinfektion zu erreichen. Die vorgestellte Methode soll Elektrofahrzeuge von Virionen (d. h. HIV-1) abisolaten und eine höhere Effizienz und Ausbeute im Vergleich zu herkömmlichen Ultrazentrifugationsmethoden ermöglichen. Unser Protokoll enthält drei Schritte: EV-Ausfällung, Dichtegradiententrennung und Partikelerfassung. Downstream-Assays (z. B. Western Blot und PCR) können direkt nach der Partikelerfassung ausgeführt werden. Diese Methode ist vorteilhaft gegenüber anderen Isolationsmethoden (d. h. Ultrazentrifugation), da sie die Verwendung von minimalen Startvolumina ermöglicht. Darüber hinaus ist es benutzerfreundlicher als alternative EV-Isolationsmethoden, die mehrere Ultrazentrifugationsschritte erfordern. Die vorgestellte Methode ist jedoch in ihrem Umfang an funktionellen EV-Assays begrenzt, da es schwierig ist, intakte Elektrofahrzeuge aus unseren Partikeln zu entfernen. Darüber hinaus ist diese Methode auf einen rein forschungsbasierten Rahmen zugeschnitten und wäre kommerziell nicht rentabel.