9-फेनांथ्रोल-संवेदनशील Cation धाराओं के लक्षण वर्णन के लिए हौसले से अलग मानव Detrusor चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं की तैयारी और उपयोग

मूत्राशय की दीवार के भीतर मौजूद डिट्रसर चिकनी मांसपेशी (डीएसएम) कोशिकाएं अंततः मूत्र भंडारण और शून्य की सुविधा प्रदान करती हैं। व्यवहार्य, ताजा और अलग-थलग पड़ी डीएसएम कोशिकाओं की तैयारी एक महत्वपूर्ण तकनीकी चुनौती प्रस्तुत करती है जिसकी उपलब्धि बाद के कार्यात्मक और आणविक अध्ययनों के लिए इष्टतम कोशिकाएं प्रदान करती है। विधि विकसित और यहां सविस्तार, सफलतापूर्वक एक दशक से अधिक के लिए हमारे समूह द्वारा इस्तेमाल किया, मानव मूत्राशय खुले मूत्राशय सर्जरी से प्राप्त नमूनों के विच्छेदन का वर्णन करता है एक एंजाइमैटिक दो डीएसएम टुकड़े और यांत्रिक trituration के कदम उपचार के बाद हौसले से अलग DSM कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए । प्रारंभिक चरण में म्यूकोसा (यूरोथेलियम, लेमिना प्रोपेरिया, और मस्कुलिस म्यूकोसा) और आसन्न संयोजी, संवहनी और मौजूद ऊतकों से डीएसएम परत (जिसे मस्कुलिस प्रोपरिया के रूप में भी जाना जाता है) को अलग करने के लिए विच्छेदन शामिल है। इसके बाद डीएसएम को नाममात्र सीए^{2 +}में टुकड़ों (2-3 मिमी x 4-6 मिमी) में काट दिया जाता है-जिसमें विच्छेदन/पाचन समाधान (डीएस) होता है । डीएसएम टुकड़े अगले स्थानांतरित कर रहे है और क्रमिक रूप से प्रति कदम 30-45 मिन के लिए ~37 डिग्री सेल्सियस पर papain और कोलेजेनेज युक्त डीएस के साथ अलग से इलाज किया जाता है । एंजाइम-मुक्त गोजातीय सीरम और आग पॉलिश पिपेट के साथ त्रितुएं के साथ डीएस युक्त धोता के बाद, टुकड़े एकल डीएसएम कोशिकाओं को छोड़ते हैं। हौसले से अलग डीएसएम कोशिकाएं आदर्श रूप से आयन चैनलों के पैच-क्लैंप इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल और औषधीय लक्षणों के लिए अनुकूल हैं। विशेष रूप से, हम बताते हैं कि TRPM4 चैनल अवरोधक 9-phenanthrol वोल्टेज-कदम पैदा की गई cation धाराओं को कम कर देता है जो एम्फोटेरिसिन-बी छिद्रित पैच-क्लैंप दृष्टिकोण के साथ दर्ज की गई है। डीएसएम कोशिकाओं का अध्ययन अन्य तकनीकों जैसे एकल सेल आरटी-पीसीआर, माइक्रोऐरे विश्लेषण, इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री, सीटू निकटता लिगामेंट परख में और सीए^{2 +} इमेजिंग द्वारा भी किया जा सकता है। एकल डीएसएम कोशिकाओं का उपयोग करने का मुख्य लाभ यह है कि किए गए अवलोकन सीधे एकल कोशिका विशेषताओं से संबंधित हैं। हौसले से अलग मानव डीएसएम कोशिकाओं के अध्ययनों ने मूत्राशय में सेशन-चाली योग्य सहित विभिन्न आयन चैनलों के गुणों की विशेषता वाली महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान की है और डीएसएम सेलुलर गुणों और नियामक तंत्र ों को स्पष्ट करने में सोने के मानक के रूप में जारी रहेगा।