4-티우라실(Ers4tU)을 가진 생체내 RNA의 매우 신속하고 특정한 대사 라벨링

뉴클레오티드 유사체, 4-티우라실 (4tU)은 세포에 의해 쉽게 채택되고생체 내에서 전사될 때 RNA에 통합되어 짧은 기간 동안 생산된 RNA를 분리할 수 있습니다. 이는 스트렙타비딘 코팅 비드를 사용하여 통합된 티오기와 친화도 정화에 비오틴 모이어티를 부착함으로써 수행된다. 기존 RNA가 없는 순수하고 새로 합성된 RNA의 좋은 수율을 달성하면 라벨링 시간이 단축되고 운동 연구에서 시간적 분해능이 증가합니다. 이것은 새로 합성된 RNA의 매우 특이하고 높은 수율 정제를 위한 프로토콜이다. 여기에 제시된 프로토콜은 효모 사카로마이세스 세레비시아에서 RNA가 어떻게 추출되는지 설명합니다. 그러나, 총 RNA로부터 티오레이트 RNA의 정제를 위한 프로토콜은 일단 세포로부터 추출되면 임의의 유기체로부터 RNA를 사용하여 효과적이어야 한다. 정제된 RNA는 역전사-qPCR, RNA-seq 및 SLAM-seq와 같은 많은 널리 사용되는 기술에 의한 분석에 적합하다. 이 기술의 특이성, 감도 및 유연성은 RNA 대사에 대한 비교할 수없는 통찰력을 허용합니다.