Gebruik van bevroren weefsel in de Komeet Assay voor de evaluatie van DNA-schade

De komeettest wint aan populariteit als middel om DNA-schade in gekweekte cellen en weefsels te beoordelen, met name na blootstelling aan chemicaliën of andere milieustressoren. Het gebruik van de komeettest bij regelgevingstests op genotoxische mogelijkheden bij knaagdieren is in 2014 ingegeven door de goedkeuring van een testrichtlijn van de Organisatie voor Economische Samenwerking en Ontwikkeling (OESO). Komeettestdia's worden meestal bereid uit vers weefsel op het moment van obductie; echter, bevriezing weefsel monsters kunnen voorkomen dat logistieke uitdagingen in verband met gelijktijdige voorbereiding van dia's van meerdere organen per dier en van veel dieren per studie. Het invriezen maakt het ook mogelijk om monsters van de blootstellingsfaciliteit naar een ander laboratorium te verzenden voor analyse, en de opslag van bevroren weefsel vergemakkelijkt het uitstellen van een beslissing om DNA-schadegegevens voor een bepaald orgaan te genereren. De alkalische komeettest is nuttig voor het detecteren van blootstelling-gerelateerde DNA dubbele en single-streng pauzes, alkali-labiele laesies, en streng breekt geassocieerd met onvolledige DNA excisie reparatie. Echter, DNA-schade kan ook het gevolg zijn van mechanische scheren of onjuiste monster verwerking procedures, verstoren de resultaten van de test. Reproduceerbaarheid bij het verzamelen en verwerken van weefselmonsters tijdens de obductie kan moeilijk te controleren zijn als gevolg van fluctuerend laboratoriumpersoneel met wisselende ervaring in het oogsten van weefsels voor de komeettest. Het verbeteren van de consistentie door bijscholing of inzet van mobiele eenheden met ervaren laboratoriumpersoneel is kostbaar en mogelijk niet altijd haalbaar. Om consistente generatie van hoogwaardige monsters voor komeettestanalyse te optimaliseren, werd een methode geëvalueerd voor het homogeniseren van flash diepgevroren kubussen van weefsel met behulp van een aangepast weefselsnijdend apparaat. Monsters die met deze methode voor de komeettest zijn bereid, vergeleken in kwaliteit gunstig in kwaliteit met verse en bevroren weefselmonsters die tijdens de obductie worden geprikt. Bovendien werd een lage DNA-schade bij de uitgangswaarde gemeten in cellen van bevroren kubussen van weefsel na langdurige opslag.