一种基于强健聚合酶链反应的测定法，用于定量易碎 X 智力迟钝-1 基因中的细胞氨酸-鸟-鸟-鸟- 三核苷酸重复

易碎 X 综合征 （FXS） 和相关疾病是由易碎 X 智力迟钝-1（FMR1）基因启动子的 5' 未翻译区域 （UTR） 中细胞氨酸-瓜氨酸 -鸟-鸟苷 （CGG） 三核苷酸重复的扩展引起的。按照惯例，基因分析仪上的毛细血管电泳片段分析用于FMR1的CGG重复大小，但当重复数高于200时，需要额外的南方印斑分析才能进行精确测量。在这里，我们提出了一种准确和强大的聚合酶链反应（PCR）为基础的方法，用于定量FMR1的CGG重复。本测试的第一步是使用易碎 X PCR 试剂盒对FMR1启动子的 5'UTR 中的重复序列进行 PCR 扩增，然后对 PCR 产品进行纯化和微流体毛细管电泳仪器上的片段大小，以及随后通过使用分析软件引用已知重复项的标准来解释 CGG 重复次数。这种基于PCR的测定是可重复的，能够识别FMR1启动子的全部CGG重复，包括重复数超过200（分类为完全突变）、55至200（预突变）、46至54（中间）和10至45（正常）。它是一种经济高效的方法，有助于对 FXS 和易碎 X 相关疾病进行分类，具有鲁棒性和快速报告时间。