Étiquetage spécifique des nucléoïdes mitochondriaux pour la microscopie d’illumination structurée time-lapse

Les nucléoïdes mitochondriaux sont des particules compactes formées par des molécules d’ADN mitochondrial enduites de protéines. L’ADN mitochondrial code les ARN, les ARR et plusieurs polypeptides mitochondriaux essentiels. Les nucléoïdes mitochondriaux se divisent et distribuent dans le réseau mitochondrique dynamique qui subit la fission/fusion et d’autres changements morphologiques. La microscopie à fluorescence vivante haute résolution est une technique simple pour caractériser la position et le mouvement d’un nucléoïde. Pour cette technique, les nucléoïdes sont généralement étiquetés par des étiquettes fluorescentes de leurs composants protéiques, à savoir le facteur de transcription a (TFAM). Cependant, cette stratégie a besoin d’une surexpression d’une construction fluorescente marquée par des protéines, qui peut causer des artefacts (rapportés pour TFAM), et n’est pas faisable dans de nombreux cas. Les colorants organiques liant l’ADN n’ont pas ces inconvénients. Cependant, ils montrent toujours la coloration des ADN nucléaires et mitochondriaux, manquant ainsi de spécificité aux nucléoïdes mitochondriaux. En tenant compte des propriétés physico-chimiques de ces colorants, nous avons sélectionné une tache de gel d’acide nucléique (SYBR Gold) et avons obtenu l’étiquetage préférentiel des nucléoïdes mitochondriaux dans les cellules vivantes. Les propriétés du colorant, en particulier sa grande luminosité sur la liaison à l’ADN, permettent la quantification ultérieure du mouvement nucléoïde mitochondrial à l’aide d’images d’illumination structurées super-résolution.