Opnåelse kræft stamceller kugler fra gynækologiske og brystkræft tumorer

Kræft stamceller (CSC) er en lille befolkning med selvfornyelse og plasticitet, som er ansvarlige for tumorigenese, modstandsdygtighed over for behandling og tilbagevendende sygdom. Denne population kan identificeres ved overflademarkører, enzymatisk aktivitet og en funktionel profil. Disse tilgange i sig selv er begrænsede på grund af fænotypisk heterogenitet og CSC-plasticitet. Her opdaterer vi den sfæredannende protokol for at opnå CSC-sfærer fra brystkræft og gynækologiske kræftformer, vurdering af funktionelle egenskaber, CSC-markører og proteinudtryk. Kuglerne opnås med encellede såning ved lav tæthed i suspensionskulturen ved hjælp af et halvfast methylcellulosemedium for at undgå migration og aggregater. Denne rentable protokol kan bruges i kræft cellelinjer, men også i primære tumorer. Den tredimensionale ikke-tilhængere suspension kultur menes at efterligne tumor mikromiljø, især CSC-niche, suppleres med epidermal vækstfaktor og grundlæggende fibroblast vækstfaktor for at sikre CSC signalering. Med henblik på en robust identifikation af CSC foreslår vi en supplerende tilgang, der kombinerer funktionel og fænotypisk evaluering. Sphere-dannende kapacitet, selvfornyelse og sfære projektion område etablere CSC funktionelle egenskaber. Derudover omfatter karakterisering flow cytometri evaluering af markører, repræsenteret ved CD44⁺/ CD24^- og CD133, og Vestlige blot, overvejer ALDH. Den præsenterede protokol blev også optimeret til primære tumorprøver, efter en prøve fordøjelsesprocedure, nyttig til translationel forskning.