Dissektion, kultur og analyse af primær kranie neurale crest celler fra mus til studiet af Neural Crest celle delaminering og migration

I løbet af de sidste mange årtier har der været en øget tilgængelighed af genetisk modificerede musemodeller, der anvendes til at efterligne humane patologier. Men evnen til at studere celle bevægelser og differentiering in vivo er stadig meget vanskeligt. Neurocristopathies, eller lidelser i neurale crest afstamning, er særligt udfordrende at studere på grund af manglende adgang til centrale embryonale stadier og vanskeligheder med at adskille den neurale crest mesenchyme fra tilstødende af mesenchyme. Her har vi sat sig for at etablere en veldefineret, rutinemæssig protokol for kulturen i primære kraniale neurale crest celler. I vores tilgang vi dissekere ud musen neurale plade grænse under den indledende neurale crest induktion fase. Den neurale plade grænseregion er explanted og kultiveret. Den neurale crest celler form i en epitel ark omkring neurale plade grænsen, og ved 24 h efter explant, begynder at delaminate, undergår en epitelial-mesenchymal overgang (EMT) til at blive fuldt motile sædceller neurale crest celler. På grund af vores todimensionelle dyrkning tilgang, de særskilte vævs populationer (neurale plade versus forblandende og vandrende neurale crest) kan let skelnes. Ved hjælp af Live imaging tilgange, kan vi derefter identificere ændringer i neurale crest induktion, EMT og migrerende adfærd. Kombinationen af denne teknik med genetiske mutanter vil være en meget kraftfuld tilgang til at forstå normal og patologisk neurale crest cellebiologi.