Immunofluorescence merking av menneskelige og murine nøytrofile ekstracellulære feller i parafin-embedded tissue

Nøytrofile granulocytter, også kalt polymorfonukleære leukocytter (PMN) på grunn av deres lobulært kjerne, er den mest tallrike typen leukocytter. De modnes i benmargen og slippes ut i perifert blod, der de sirkulerer i ca 6-8 h; men i vev, kan de overleve i dagevis. Ved diapedese gjennom endotelet, de forlater blodstrømmen, skriv vev, og migrere mot området av en infeksjon etter chemotactic gradienter. Nøytrofile kan bekjempe invaderende mikroorganismer ved fagocytose, degranulering, og generering av nøytrofile ekstracellulære feller (Nets). Denne protokollen vil bidra til å oppdage NETs i parafin-embedded vev. NETs er resultatet av en prosess som kalles NETosis, som fører til utgivelsen av kjernefysiske, detaljerte og cytoplasmatiske komponenter enten fra levende (Vital NETosis) eller døende (suicidale NETosis) nøytrofile. In vitro, NETs danner sky-lignende strukturer, som opptar et mellomrom flere ganger større enn i cellene som de nedstammet fra. Ryggraden i NETs er kromatin, som et utvalg av proteiner og peptider som stammer fra granulater og cytoplasma er bundet. Dermed opprettholdes en høy lokal konsentrasjon av giftige forbindelser slik at NETs kan fange og deaktivere en rekke patogener inkludert bakterier, sopp, virus og parasitter, mens diffusjon av de svært aktive NET komponenter som fører til skade i nærliggende vev er begrenset. Likevel, i de senere årene har det blitt klart at NETs, hvis det genereres i overflod eller tømmes utilstrekkelig, har patologiske potensialet spenner fra autoimmune sykdommer til kreft. Påvisning av NETs i vevsprøver kan således ha diagnostisk betydning, og påvisning av NETs i sykt vev kan påvirke behandlingen av pasientene. Siden parafin-embedded vevsprøver er standard prøven som brukes for patologisk analyse, var det søkt å etablere en protokoll for fluorescerende farging av NET komponenter i parafin-embedded vev ved hjelp av kommersielt tilgjengelige antistoffer.