Højeffektiv Transfection af primær makrofager med in vitro transkriberet mRNA

Makrofager er fagocytiske celler specialiseret i påvisning af molekyler af ikke-selv oprindelse. Til dette formål er de udstyret med et stort udvalg af mønster genkendelses receptorer (PRRs). Desværre gør dette også makrofager særligt udfordrende at transficere som transfektering reagens og transficeret nukleinsyre syrer er ofte anerkendt af PRRS som non-Self. Transfektering medfører derfor ofte makrofagaktivering og nedbrydning af de transficeret nukleinsyrer eller endog selvmord på makrofager. Her beskriver vi en protokol, der giver mulighed for højeffektiv transfektering af murine primær makrofager såsom peritonealdialyse makrofager (PM) og knoglemarv-afledte makrofager (bmdm) med mRNA in vitro transkriberet fra DNA-skabeloner såsom Plasmids. Med denne enkle protokol opnås transfektering på ca. 50-65% for PM og ca. 85% for bmdm uden cytotoksicitet eller immunogenicitet observeret. Vi beskriver i detaljer den generation af mRNA for transfektering fra DNA-konstruktioner som plasmider og transfektering procedure.