In situ monitoring van transitieve gevormde moleculaire Chaperone-assemblages in bacteriën, gist en menselijke cellen

J-Domain proteïnen (JDPs) vormen de grootste en meest diverse co-Chaperone familie in eukaryote cellen. Uit recente bevindingen blijkt dat specifieke leden van de JDP-familie voorbijgaande heterocomplexen in eukaryoten kunnen vormen om de substraat keuze voor de 70 kDa-warmteshock proteïne (Hsp70) chaperongebaseerde eiwit disaggregassen te verfijnen. De JDP-complexen richten op acute/chronische stress geïnduceerde geaggregeerde eiwitten en helpen vermoedelijk de disaggregassen samen te stellen door meerdere Hsp70s aan het oppervlak van eiwit aggregaten te rekruteren. De omvang van het door deze fysiek werkende JDPs gevormde netwerk van eiwit kwaliteitscontrole (PQC) blijft in vivo grotendeels onkarakteriseerd. Hier beschrijven we een microscopie gebaseerde in-situ proteïne-interactie test genaamd de Proximity ligatie assay (PLA), die in staat is om deze transitieve gevormde chaperonne-complexen robuust te vangen in verschillende cellulaire compartimenten van eukaryotische cellen. Ons werk breidt de tewerkstelling van Pla uit menselijke cellen naar gist (Saccharomyces cerevisiae) en bacteriën (Escherichia coli), waardoor een belangrijk instrument om de dynamiek van tijdelijk gevormde eiwit assemblages in beide prokaryotische en eukaryote cellen.