Imaging ottico di miociti Murine Ventricolari isolati

La capacità di isolare i miociti cardiaci adulti ha permesso ai ricercatori di studiare una varietà di patologie cardiache a livello di singola cellula. Mentre i progressi nei coloranti sensibili al calcio hanno permesso la robusta registrazione ottica della dinamica del calcio a singola cellula, la registrazione di robusti segnali di tensione ottica transmembrana è rimasta difficile. Probabilmente, questo è a causa del basso rapporto singolo/rumore, fototossicità, e fotosbiancamento di coloranti potentiometrici tradizionali. Pertanto, le misurazioni della tensione a cella singola sono state a lungo limitate alla tecnica di morsetto che, mentre lo standard d'oro, è tecnicamente impegnativa e bassa produttività. Tuttavia, con lo sviluppo di nuovi coloranti potentiometrici, grandi e veloci risposte ottiche ai cambiamenti di tensione possono essere ottenute con poca o nessuna fototossicità e fotosbiancamento. Questo protocollo descrive in dettaglio come isolare i miociti murini adulti che possono essere utilizzati per le misurazioni di accorciamento cellulare, calcio e tensione ottica. In particolare, il protocollo descrive come utilizzare un colorante di calcio ratiometrico, un colorante di calcio a singola eccitazione e un singolo colorante di tensione di eccitazione. Questo approccio può essere utilizzato per valutare la cardiotossicità e l'aritmia di vari agenti chimici. Mentre la fototossicità è ancora un problema a livello di singola cellula, la metodologia è discussa su come ridurla.