Imagerie cellulaire en direct pour évaluer la dynamique du moment de la métaphase et le destin cellulaire à la suite de perturbations mitotiques spindle

L'imagerie en accéléré cellulaire en direct est un outil important en biologie cellulaire qui donne un aperçu des processus cellulaires qui pourraient autrement être négligés, mal compris ou mal interprétés par l'analyse des cellules fixes. Bien que l'imagerie et l'analyse des cellules fixes soient robustes et suffisantes pour observer l'état stable cellulaire, elle peut être limitée dans la définition d'un ordre temporel des événements au niveau cellulaire et est mal équipée pour évaluer la nature transitoire des processus dynamiques, y compris progression mitotique. En revanche, l'imagerie cellulaire vivante est un outil éloquent qui peut être utilisé pour observer les processus cellulaires au niveau d'une seule cellule au fil du temps et a la capacité de capturer la dynamique des processus qui seraient autrement mal représentés dans l'imagerie cellulaire fixe. Ici nous décrivons une approche pour produire des cellules portant des marqueurs fluorescents étiquetés de chromatine et de microtubules et leur utilisation dans les approches vivantes d'imagerie de cellules pour surveiller l'alignement de chromosome de métaphase et la sortie mitotique. Nous décrivons des techniques basées sur l'imagerie pour évaluer la dynamique de la formation de fuseau et de la progression mitotique, y compris l'identification des cellules à divers stades de la mitose, l'identification et le suivi des défauts mitotiques, et l'analyse de la dynamique du fuseau et destin de cellule mitotique suivant le traitement avec des inhibiteurs mitotic.