A السل الجزيئي ة الحمل البكتيري ة (TB-MBLA)

السل سببه السل الميكوباكتري (Mtb)، وهو ممرض تصنفه الأمم المتحدة كمادة بيولوجية خطيرة من الفئة باء. من أجل سلامة العمال ، يجب أن يتم التعامل مع جميع العينات المفترض أنها تحمل Mtb في مختبر مستوى الاحتواء (CL) 3. اختبار قياس الحمل البكتيري الجزيئي للسل (TB-MBLA) هو اختبار تفاعل سلسلة بوليميراز كمي عكسي (RT-qPCR) يحدد كمية الحمل العصوية Mtb باستخدام المبشرات والمسابير ذات العلامات المزدوجة لـ 16S rRNA. نحن نصف استخدام تعطيل الحرارة لجعل عينات السل غير معدية مع الحفاظ على الحمض النووي الريبي للسل-MBLA. يتم غلي 1 مل العلية من عينة البلغم في أنابيب الطرد المركزي مغلقة بإحكام 15 مل لمدة 20 دقيقة إما في 80 درجة مئوية، 85 درجة مئوية، أو 95 درجة مئوية لتعطيل عصية Mtb. وأكدت زراعة عينات الحرارة المعطلة والخاضعة للرقابة (الحية) لمدة 42 يوماً وفاة السل. ثم يتم ارتفاع العينة المعطلة مع 100 ميكرولتر من التحكم في الاستخراج ويتم استخراج الحمض النووي الريبي بعد إجراء عزل الحمض النووي الريبي القياسي. ولم يلاحظ أي نمو في ثقافات العينات المعالجة بالحرارة. يخضع الحمض النووي الريبي المعزول لـ RT-qPCR في الوقت الحقيقي ، مما يضخم هدفًا محددًا في جين Mtb 16S rRNA ، مما يؤدي إلى نتائج في شكل دورات قياس كمي (Cq). يتم استخدام منحنى قياسي لترجمة Cq إلى حمل بكتيري ، أو وحدات تشكيل مستعمرة تقديرية لكل مل (eCFU / mL). هناك علاقة عكسية بين Cq والحمولة البكتيرية للعينة. القيد هو أن تعطيل الحرارة يتساقط على بعض الخلايا ، مما يعرض الحمض النووي الريبي لRNases التي تسبب خسارة < 1 سجل₁₀eCFU / مل (أي ، < 10 CFU / مل). ستحدد دراسات أخرى نسبة المرضى الذين يعانون من عبء منخفض للغاية الذين يتسببون في نتائج سلبية كاذبة بسبب تعطيل الحرارة.