पूरे माउंट में सीटू संकरण में जेब्राफिश भ्रूण और ट्यूब गठन परख में iPSC-ECs में परख संवहनी विकास में एंडोग्लिन की भूमिका का अध्ययन करने के लिए

संवहनी विकास विशिष्ट जीन की अनुक्रमिक अभिव्यक्ति द्वारा निर्धारित किया जाता है, जिसका विभिन्न विकासात्मक चरणों के दौरान जेब्राफिश में सीटू संकरण परख में प्रदर्शन करके अध्ययन किया जा सकता है। वंशानुगत रक्तस्रावी टेलांगिया (एचएचटी) के विकास के दौरान पोत गठन में एंडोग्लिन (इंग्लैंड) की भूमिका की जांच करने के लिए, जेब्राफिश में एंजी के मॉर्फोलिन-मध्यस्थता लक्षित नॉकडाउन का उपयोग इसकी लौकिक अभिव्यक्ति और संबद्ध कार्यों का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। यहां, सीटू आरएनए संकरण (इच्छा) में पूरे माउंट को ज़ेब्राफिश भ्रूण में इंग्लैंड और उसके डाउनस्ट्रीम जीन के विश्लेषण के लिए नियोजित किया जाता है। इसके अलावा, एचएचटी रोगी-व्युत्पन्न प्रेरित प्लीरिटेंट स्टेम सेल-विभेदित एंडोथेलियल कोशिकाओं (आईपीएससी-ईसी; इंग्लैंड म्यूटेशन के साथ) में ट्यूब गठन परख ें की जाती हैं। सीटू संकरण में पूरी राशि का उपयोग करके एक विशिष्ट सिग्नल एम्पलिंग सिस्टम - इच्छा पारंपरिक तरीकों की तुलना में उच्च संकल्प और कम पृष्ठभूमि परिणाम प्रदान करती है। बेहतर संकेत प्राप्त करने के लिए, निर्धारण के बाद का समय जांच संकरण के बाद 30 min में समायोजित किया जाता है। क्योंकि फ्लोरेसेंस धुंधला ज़ेब्राफिश भ्रूण में संवेदनशील नहीं है, यह diaminobezidine (DAB) यहां धुंधला के साथ प्रतिस्थापित किया जाता है । इस प्रोटोकॉल में, एचएचटी रोगी-व्युत्पन्न आईपीएससी लाइनें जिनमें एक eng उत्परिवर्तन होते हैं, को एंडोथेलियल कोशिकाओं में अंतर किया जाता है। 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिन के लिए तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स के साथ एक प्लेट कोटिंग करने के बाद, आईपीएससी-ईसीएस कुओं में मोनोलेयर के रूप में वरीयता प्राप्त कर रहे हैं और 3 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर रखा जाता है। फिर, ट्यूब की लंबाई और शाखाओं की संख्या सूक्ष्म छवियों का उपयोग करके गणना की जाती है। इस प्रकार, इस बेहतर इच्छा प्रोटोकॉल के साथ, यह दिखाया गया है कि कम eng अभिव्यक्ति जेब्राफिश भ्रूण में एंडोथेलियल प्रोजेनिटर गठन को प्रभावित करती है। एचएचटी के साथ एक मरीज से प्राप्त आईपीएससी-ईसीएस का उपयोग करके ट्यूब गठन परख द्वारा इसकी पुष्टि की जाती है। ये परख जल्दी संवहनी विकास में इंग्लैंड के लिए भूमिका की पुष्टि करते हैं ।