Isolement et 3D Collagen Sandwich Culture of Primary Mouse Hepatocytes to Study the Role of Cytoskeleton in Bile Canalicular Formation In Vitro

Les hépatocytes sont les cellules centrales du foie responsables de sa fonction métabolique. En tant que tels, ils forment un épithélium polarisé unique, dans lequel deux hépatocytes ou plus contribuent membranes apicales pour former un réseau canaliculaire biliaire à travers lequel la bile est sécrétée. La polarisation d'hépatocyte est essentielle pour la formation canaliculaire correcte et dépend des interactions entre le cytosquelette d'hépatocyte, les contacts de cellule-cellule, et la matrice extracellulaire. Les études in vitro de la participation de cytosquelette d'hépatocyte dans la formation de canaliculi et de sa réponse aux situations pathologiques sont handicapées par le manque de culture cellulaire, qui ressemblerait étroitement à la structure de réseau de canaliculi in vivo. Décrit ici est un protocole pour l'isolement des hépatocytes de souris du foie adulte de souris utilisant une technique modifiée de perfusion de collagène. On décrit également la production de la culture dans un arrangement 3D de sandwich de collagène, qui est employé pour l'immunolabeling des composants cytoskeletal pour étudier la formation canaliculaire biliaire et sa réponse aux traitements in vitro. Il est démontré que les cultures de sandwichs au collagène 3D d'hépatocyte s'adressent aux traitements avec des toxines (éthanol) ou des cytosquelettes d'actine qui modifient les médicaments (p. ex. la blebbistatin) et servent d'outil précieux pour les études in vitro de la formation et de la fonction du canalcisique bilique.