Detectie van longtumorprogressie bij muizen door echografie

Summary

Dit protocol beschrijft de stappen die zijn genomen om KRAS longtumoren bij muizen te induceren, evenals de kwantificering van gevormde tumoren door echografie. Kleine tumoren worden gevisualiseerd in vroege tijdpunten als B-lijnen. Op latere tijdpunten worden relatieve tumorvolumemetingen bereikt door het meetinstrument in de echografiesoftware.

Abstract

Met ~ 1,6 miljoen slachtoffers per jaar, longkanker draagt enorm bij aan de wereldwijde last van kanker. Longkanker wordt deels gedreven door genetische veranderingen in oncogenes zoals de KRAS oncogene, die ~ 25% van de gevallen van longkanker vormt. De moeilijkheid in het therapeutisch richten op KRAS-gedreven longkanker komt deels voort uit het hebben van slechte modellen die de progressie van de ziekte in het lab kunnen nabootsen. We beschrijven een methode die de relatieve kwantificering van primaire KRAS longtumoren in een Cre-inducible LSL-KRAS G12D muis model via echografie mogelijk maakt. Deze methode is gebaseerd op de helderheid (B)-modus verwerving van de long parenchyma. Tumoren die in eerste instantie worden gevormd in dit model worden gevisualiseerd als B-lijnen en kunnen worden gekwantificeerd door het tellen van het aantal B-lijnen aanwezig in de verworven beelden. Deze zouden het relatieve tumornummer vertegenwoordigen dat op de oppervlakte van de muislong wordt gevormd. Als de gevormde tumoren ontwikkelen met de tijd, ze worden gezien als diepe gespleten haarvaten in de long parenchyma. Aangezien de omtrek van de gevormde tumor goed gedefinieerd is, wordt het berekenen van het relatieve tumorvolume bereikt door de lengte en breedte van de tumor te meten en toe te passen in de formule die wordt gebruikt voor tumorrempermetingen. Echografie is een niet-invasieve, snelle en gebruiksvriendelijke techniek die vaak wordt gebruikt voor tumorkwantificeringen bij muizen. Hoewel artefacten kunnen verschijnen bij het verkrijgen van echografiebeelden, is aangetoond dat deze beeldvormingstechniek voordeliger is voor tumorkwantificeringen bij muizen in vergelijking met andere beeldvormingstechnieken zoals computertomografie (CT) beeldvorming en bioluminescentiebeeldvorming (BLI). Onderzoekers kunnen nieuwe therapeutische doelen met behulp van deze techniek te onderzoeken door het vergelijken van longtumor initiatie en progressie tussen verschillende groepen muizen.

Introduction

Als de belangrijkste oorzaak van kankergerelateerde sterfgevallen wereldwijd, blijft longkanker vuurvast voor behandelingen, voornamelijk door gebrek aan relevante preklinische modellen die de ziekte in het lab kunnen samenvatten¹. Ongeveer 25% van de gevallen van longkanker is het gevolg van mutaties in het KRAS-oncogene^2. KRAS-gedreven longkanker wordt vaak geassocieerd met een slechte prognose en een lage respons op therapie, wijzend op het belang van verdere studies in deze ziekte².

We hebben een methode geoptimaliseerd die de relatieve evaluatie van de groei van lo....

Protocol

Dierstudies werden uitgevoerd in overeenstemming met het Institutioneel Comité voor dierenverzorging en -gebruik (IACUC) van de McGill University en de procedures werden goedgekeurd door het Comité voor dierenwelzijn van de McGill University (protocol voor dierenwelzijn # 2009-5754).

1. Generatie ca2Cre-shp53 Lentivirale Titre

OPMERKING: Het volgende protocol is hetzelfde als dat beschreven in Xia et al.⁶, met kleine wijzigingen.

1. Bereiding van lentivirus (voor 15 cm x 10 cm gerechten)
   1. Op dag 1, plaat gezonde HEK293T cellen (7,5 x 10⁶ cellen per 10 cm schotel) m....

Discussion

We demonstreren een methode die de groei van longtumoren in het Cre-inducible LSL-KRAS G12D muismodel kan beoordelen aan de hand van echografie. Deze methode kan worden gebruikt voor de evaluatie van het effect van farmacologische remmers op de groei van longtumoren. Het kan ook worden gebruikt om de groei van longtumoren tussen muizen van verschillende genetische achtergronden te vergelijken. Het gebruik van deze techniek vereist echter geen gespecialiseerde rekenvaardigheden, maar het is belangrijk om systematisch te z.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.45 μm Acrodisc Syringe Filters	Pall Corporation	PN 4614
100-mm Cell Cultre Plate	CELLSTAR	664 160
6-well Cell Culture Plate	CELLSTAR	657 160
Amicon Ultra - 15 Centrifugal Filter Units	Merck Millipore Ltd.	UFC910024
BD LSR-Fortessa	BD Biosciences	649225B 3024
CA2Cre-shp53 lentiviral vector			From Dr. I Verma Laboratory
DMEM	Multicell	319-005-CL
FBS	Multicell	80450
LSL-KRASG12D mouse	JAX Mice	8179
MX550S; Centre Transmit: 40 MHz	FUJIFILM VisualSonics	51070
OptiMEM	gibco	11058-021
Pen/strep	Multicell	450-201-EL
pMD2.G	Addgene	12259
PsPAX2	Addgene	12260
VEVO-3100	FUJIFILM VisualSonics	51072-50