Aislamiento de fibroblastos dérmicos humanos adultos de la piel abdominal y generación de células madre pluripotentes inducidas utilizando un método no integrador

Hasta la fecha se podría considerar que las células madre pluripotentes inducidas (iPSC) son una fuente prometedora de células pluripotentes para el tratamiento de enfermedades no tratables, para la reconstitución y regeneración de tejidos lesionados y para el desarrollo de nuevos fármacos. A pesar de todas las ventajas relacionadas con el uso de iPSCs, como el bajo riesgo de rechazo, las menores cuestiones éticas, y la posibilidad de obtenerlas de pacientes jóvenes y viejos sin ninguna diferencia en su potencial de reprogramación, problemas para superar siguen siendo numerosos. De hecho, la reprogramación celular realizada con virus virales e integradores puede causar infecciones y la introducción de los genes requeridos puede inducir una inestabilidad genómica de la célula receptora, lo que perjudica su uso en la clínica. En particular, hay muchas preocupaciones sobre el uso del gen c-Myc, bien conocido a partir de varios estudios por su actividad inductora de mutaciones. Los fibroblastos han surgido como la población celular adecuada para la reprogramación celular, ya que son fáciles de aislar y cultivar y se cosechan mediante una biopsia de punzonado de piel mínimamente invasiva. El protocolo descrito aquí proporciona una descripción detallada paso a paso de todo el procedimiento, desde el procesamiento de muestras para obtener cultivos celulares, la elección de reactivos y suministros, la limpieza y la preparación, hasta la reprogramación celular por medio de un comercial RNA no modificado (NM-RNA) kit de reprogramación basado. El kit de reprogramación elegido permite una reprogramación efectiva del fibroblasto dérmico humano a los ISPC y se pueden ver pequeñas colonias tan pronto como 24 h después de la primera transfección, incluso con modificaciones con respecto a la hoja de datos estándar. El procedimiento de reprogramación utilizado en este protocolo ofrece la ventaja de una reprogramación segura, sin el riesgo de infecciones causadas por métodos virales basados en vectores, reduce los mecanismos de defensa celular y permite la generación de iPSC libres de xeno, todos características críticas que son obligatorias para otras aplicaciones clínicas.