Bereiding van Meiotic Chromosome Spreads van Zebrafish Spermatocyten

Meiose is het belangrijkste cellulaire proces dat nodig is om haploïde gameten te maken voor seksuele voortplanting. Modelorganismen hebben een belangrijke rol gespeeld bij het begrijpen van de chromosoomgebeurtenissen die plaatsvinden tijdens de meiotische profase, waaronder de koppeling, synapsis en recombinatiegebeurtenissen die zorgen voor een goede chromosoomsegregatie. Hoewel de muis een belangrijk model is geweest voor het begrijpen van de moleculaire mechanismen die aan deze processen ten grondslag liggen, zijn niet alle meiotische gebeurtenissen in dit systeem analoog aan menselijke meiose. We hebben onlangs het opwindende potentieel van de zebravissen aangetoond als een model van menselijke spermatogenese. Hier beschrijven we, in detail, onze methoden om meiotische chromosomen en bijbehorende eiwitten te visualiseren in chromosoomspreadpreparaten. Deze preparaten hebben het voordeel dat de analyse van chromosoomstructuren met hoge resolutie kan worden geanalyseerd. Ten eerste beschrijven we de procedure voor het ontleden van teelballen van volwassen zebravis, gevolgd door celdissociatie, lyse en verspreiding van de chromosomen. Vervolgens beschrijven we de procedure voor het detecteren van de lokalisatie van meiotische chromosoomeiwitten, door immunofluorescentiedetectie en nucleïnezuursequenties, door fluorescentie in situ hybridisatie (FISH). Deze technieken omvatten een nuttige set van instrumenten voor de cytologische analyse van meiotic chromatine architectuur in het zebravissysteem. Onderzoekers in de zebravisgemeenschap moeten deze technieken snel onder de knie kunnen krijgen en opnemen in hun standaardanalyses van de voortplantingsfunctie.