Одноклеточное разрешение Трехмерная визуализация нетронутых органоидов

Органоидная технология, в пробирке 3D культивирования миниатюрных тканей, открыла новое экспериментальное окно для клеточных процессов, которые регулируют развитие органов и функции, а также болезни. Микроскопия флуоресценции сыграла важную роль в детальном характеристике их клеточного состава и демонстрации их сходства с тканью, из которого они происходят. В этой статье мы представляем всеобъемлющий протокол для 3D-изображения целых органоидов с высоким разрешением при иммунофлуоресцентной маркировке. Этот метод широко применим для визуализации органоидов, отличающихся по происхождению, размеру и форме. До сих пор мы применили метод дыхательных путей, толстой кишки, почек и печени органоидов, полученных из здоровых тканей человека, а также органоидов опухоли молочной железы человека и органоидов молочной железы мыши. Мы используем оптический клиринговый агент FUnGI, который позволяет приобрести целые 3D органоиды с возможностью одноклеточной количественной оценки маркеров. Этот трехдневный протокол от сбора органоидов до анализа изображений оптимизирован для 3D-изображения с использованием конфокальная микроскопия.