Lokalisering og kvantifisering av begomovirus i whitefly vev av immunofluorescens og kvantitativ pcr

Begomovirus (slekten Begomovirus, familie Geminiviridae) overføres av hvite fluer i Bemisia tabaci-komplekset på en vedvarende, sirkulasjonsmåte. Tatt i betraktning den omfattende skaden forårsaket av begomovirus for å beskjære produksjonen over hele verden, er det viktig å forstå samspillet mellom begomovirus og deres whitefly vektor. For å gjøre dette, lokalisering og kvantifisering av viruset i vektorvev er avgjørende. Her, ved hjelp av tomat gul blad curl virus (TYLCV) som et eksempel, beskriver vi en detaljert protokoll for å lokalisere begomovirus i whitefly midguts, primære spyttkjertler, og eggstokkene ved immunofluorescens. Metoden er basert på bruk av spesifikke antistoffer mot et viruspelsprotein, dye-merket sekundære antistoffer og et konfokal mikroskop. Protokollen kan også brukes til å kolokalisere begomovirale og whitefly proteiner. Vi beskriver videre en protokoll for kvantifisering av TYLCV i whitefly midguts, primære spyttkjertler, hemolymph, og eggstokkene av kvantitative PCR (qPCR). Ved hjelp av primere som er spesielt utviklet for TYLCV, tillater protokollene for kvantifisering sammenligning av mengden TYLCV i forskjellige vev av whitefly. Den beskrevne protokollen er potensielt nyttig for kvantifisering av begomovirus i kroppen til en whitefly og en virusinfisert plante. Disse protokollene kan brukes til å analysere sirkulasjonsveien til begomovirus i whitefly eller som et supplement til andre metoder for å studere whitefly-begomovirus interaksjoner.