LarvaSPA, een methode voor het monteren van Drosophila Larve voor lange termijn Time-Lapse Imaging

Live imaging is een waardevolle aanpak voor het onderzoeken van celbiologie vragen. De Drosophila larve is bijzonder geschikt voor in vivo levende beeldvorming omdat de larve body wall en de meeste inwendige organen transparant zijn. Echter, continue live beeldvorming van intacte Drosophila larven voor langer dan 30 min is een uitdaging, omdat het moeilijk is om niet-invasief immobilisatieimmobilizing larven voor een lange tijd. Hier presenteren we een larve montagemethode genaamd LarvaSPA die het mogelijk maakt voor continue beeldvorming van levende Drosophila larven met een hoge temporele en ruimtelijke resolutie voor langer dan 10 uur. Deze methode omvat het gedeeltelijk bevestigen van larven aan de coverslip met behulp van een UV-reactieve lijm en bovendien het beperken van larve beweging met behulp van een polydimethylsiloxane (PDMS) blok. Deze methode is compatibel met larven in ontwikkelingsstadia van tweede instar tot zwervende derde instar. We tonen toepassingen van deze methode bij het bestuderen van dynamische processen van Drosophila somatosensorische neuronen, waaronder dendrietgroei en door verwondingen veroorzaakte dendrite degeneratie. Deze methode kan ook worden toegepast om vele andere cellulaire processen die gebeuren in de buurt van de larve body wall te bestuderen.