使用色马格龙的超分辨率生物成像时代3D色变的高精度校正

定量多色荧光显微镜依赖于不同波长获得的颜色通道的精心空间匹配。由于色差和摄像机的不完全对齐，每个通道中获取的图像可能会移动和放大，并在三个维度中的任何一个中相对旋转。使用经典的校准方法，色变通过附着在盖玻片表面的多色珠子进行测量，并且有许多软件可用于测量此类校准样品的色差。然而，色差随深度变化而变化，随观察条件而变化，由生物样品本身引起，从而阻碍确定感兴趣样品中和体积中染色体变化的真实量。以更高的精度校正色差对于超分辨率显微镜特别相关，其中只有轻微的色移可能会影响定量分析，并改变多色图像的解释。我们开发了一种开源软件Chromagnon和配套方法，用于测量和校正生物样品中的3D色变。在这里，我们提供详细的应用协议，其中包括样品制备、数据采集和软件处理的特殊要求，以测量感兴趣的生物样品的色的变化。