Identifikation af cellereceptorer ved hjælp af genome-skala CRISPR/Cas9 genetiske skærme

Intercellulære kommunikation medieret af direkte interaktioner mellem membran-indlejrede celleoverflade receptorer er afgørende for den normale udvikling og funktion af flercellede organismer. Detektering af disse interaktioner er dog fortsat teknisk udfordrende. Dette manuskript beskriver en systematisk genom-skala CRISPR/Cas9 knockout genetisk screening tilgang, der afslører cellulære veje, der kræves for specifikke celle overflade anerkendelse begivenheder. Denne analyse udnytter rekombinant proteiner produceret i et pattedyr protein ekspression system som ivrig bindende sonder til at identificere interaktion partnere i en celle-baseret genetisk skærm. Denne metode kan anvendes til at identificere de gener, der er nødvendige for celleoverfladeinteraktioner, der påvises ved rekombinant bindingssonder, der svarer til ektodomæner af membraninfæsterede receptorer. Det er vigtigt, i betragtning af genom-skala karakter af denne tilgang, det har også den fordel, at ikke kun identificere den direkte receptor, men også de cellulære komponenter, der er nødvendige for præsentationen af receptoren på celleoverfladen, hvilket giver værdifuld indsigt i biologi receptoren.