Identifizierung von Zelloberflächenrezeptoren mit Genom-Scale CRISPR/Cas9 Genetic Screens

Die interzelluläre Kommunikation, die durch direkte Wechselwirkungen zwischen membraneingebetteten Zelloberflächenrezeptoren vermittelt wird, ist entscheidend für die normale Entwicklung und Funktionsweise multizellulärer Organismen. Die Erkennung dieser Wechselwirkungen bleibt jedoch technisch anspruchsvoll. Dieses Manuskript beschreibt einen systematischen CRISPR/Cas9-Knockout-Genscreening-Ansatz im Genommaßstab, der zelluläre Pfade aufzeigt, die für bestimmte Zelloberflächenerkennungsereignisse erforderlich sind. Dieser Test nutzt rekombinante Proteine, die in einem Säugetierprotein-Expressionssystem produziert werden, als aviane Bindungssonden, um Interaktionspartner in einem zellbasierten genetischen Screen zu identifizieren. Diese Methode kann verwendet werden, um die Gene zu identifizieren, die für Zelloberflächeninteraktionen notwendig sind, die von rekombinanten Bindungssonden nachgewiesen werden, die den Ektodomänen von Membran-eingebetteten Rezeptoren entsprechen. Wichtig ist, dass dieser Ansatz angesichts des genomskaligen Charakters dieses Ansatzes nicht nur den direkten Rezeptor identifiziert, sondern auch die zellulären Komponenten, die für die Darstellung des Rezeptors an der Zelloberfläche benötigt werden, und somit wertvolle Einblicke in die Biologie des Rezeptors liefert.