Cell Surface Reseptor identifikasjon ved hjelp av genom-skala CRISPR / Cas9 genetiske skjermer

Intercellulær kommunikasjon mediert av direkte interaksjoner mellom membraninbygde celleoverflatereseptorer er avgjørende for normal utvikling og funksjon av flercellede organismer. Det er imidlertid fortsatt teknisk utfordrende å oppdage disse interaksjonene. Dette manuskriptet beskriver en systematisk genom-skala CRISPR / Cas9 knockout genetisk screening tilnærming som avslører cellulære veier som kreves for bestemte celleoverflategjenkjenning hendelser. Denne analysen benytter rekombinante proteiner produsert i et pattedyrproteinuttrykkssystem som ivrige bindingssonder for å identifisere interaksjonspartnere i en cellebasert genetisk skjerm. Denne metoden kan brukes til å identifisere genene som er nødvendige for celleoverflateinteraksjoner oppdaget av rekombinant bindingssonder som tilsvarer ectodomains av membraninerte reseptorer. Viktigere, gitt genom-skala natur denne tilnærmingen, det har også fordelen av ikke bare å identifisere direkte reseptoren, men også de cellulære komponenter som er nødvendige for presentasjon av reseptoren på celleoverflaten, og dermed gi verdifull innsikt i biologien til reseptoren.