Exon Hoppa i direkt omprogrammerade Myotubes erhålls från mänskliga urin-härledda celler

Duchennes muskeldystrofi (DMD), en progressiv och dödlig muskelsjukdom, orsakas av mutationer i DMD genen som resulterar i avsaknad av dystrophin protein. Hittills har vi avslutat en prövarinitierad första-i-människa studie vid National Center of Neurology and Psychiatry baserat på systemisk injektion av morpholino oligonukleotider som är benägna att exon-53 hoppa. För effektiv behandling av DMD, in vitro-testning med myoblasts härrör från DMD patienter att screena läkemedel och bedöma patientens behörighet innan de genomför kliniska prövningar tros vara viktigt. Alldeles nyligen rapporterade vi en ny MYOD1-konverteradeurin-härledda cell (UDC) behandlas med histon metyltransferashämmare (3-deazaneplanocin En hydroklorid), som en cellulär modell av DMD. Den nya autologa UDC kan visa fenocopy av sjukdomsspecifika fenotyper av DMD, vilket leder till tillämpning av precision medicin i en mängd olika muskel-relaterade sjukdomar. I den här artikeln beskriver vi ett detaljerat protokoll för effektiv modellering av DMD muskelceller med MYOD1-konverteradeUDCs tillsammans med omvänd transkriptas polymeras kedjereaktion (RT-PCR), västra blotting och immunocytochemistry att utvärdera återställandet av dystrophin mRNA och proteinnivåer efter exon hoppa över.