남성 마우스의 생식 세포에서 리보태그 면역 강하

mRNA 풍부에 있는 다름을 정량화하는 것은 세포 생리학에 주어진 유전자 돌연변이의 충격을 이해하는 고전적인 접근입니다. 그러나, 트랜스라토메(번역된 mRNAs의 전체)의 차이를 특성화하는 것은 RNA 조절 또는 결합 단백질의 기능을 이해하려고 할 때 특히 유용한 추가적인 정보 층을 제공한다. 리보솜 프로파일링 및 폴리솜 분석을 포함하여 이를 달성하기 위한 여러 가지 방법이 개발되었습니다. 그러나, 두 방법 모두 중요한 기술적 도전을 수행하고 추가 선별 방법과 결합하지 않는 한 조직 내의 특정 세포 집단에 적용 될 수 없습니다. 대조적으로, RiboTag 방법은 적용 가능한 세포 특정 Cre 드라이버가 유효하다는 것을 제공하는 추가 된 선별 단계 없이 특정 세포 집단에서 리보솜 관련 RNA의 식별을 허용하는 유전 기반, 효율적이고 기술적으로 간단한 대안입니다. 이 방법은 유전 모델, 샘플 수집, 면역 침전 및 다운스트림 RNA 분석을 생성하는 사육으로 구성됩니다. 여기에서, 우리는 남성 불임에 필요한 RNA 결합 단백질을 위한 성인 남성 마우스 세균 세포 돌연변이에서 이 과정을 설명합니다. 배경을 줄이고 출력을 최적화하기 위해 효율적인 식민지 관리 및 올바른 유전 적 배경 및 면역 강박의 생성에 초점을 맞춘 사육에 대한 고려 사항에 특별한주의를 기울입니다. 문제 해결 옵션, 추가 확인 실험 및 잠재적인 다운스트림 응용 프로그램에 대한 논의도 포함되어 있습니다. 제시된 유전 적 도구 및 분자 프로토콜은 돌연변이 표현형의 분자 드라이버에 알리는 것을 목표로 복잡한 조직 또는 비정상적인 mRNA 저장 및 번역을 가진 시스템에서 특정 세포 집단의 리보솜 관련 RNA를 기술하는 강력한 방법을 나타냅니다.