Detektion av Protein S-Acylation med Acyl-Harts Assisted Capture

Protein S-acylation, även kallad S-palmitoylering, är en reversibel post-translationell modifiering av cysteinrester med långkedjiga fettsyror via en labile tiooter bindning. S-acylation, som håller på att växa fram som en utbredd regleringsmekanism, kan modulera nästan alla aspekter av proteinernas biologiska aktivitet, från komplex bildning till proteinhandel och proteinstabilitet. Den senaste tidens framsteg i förståelsen av proteinets biologiska funktion S-acylation uppnåddes till stor del på grund av utvecklingen av nya biokemiska verktyg som möjliggör robust och känslig detektion av protein S-acylation i en mängd olika biologiska prover. Här beskriver vi acyl harts-assisted capture (Acyl-RAC), en nyligen utvecklad metod baserad på selektiv fångst av endogent S-acylated proteiner av tiool-reaktiva Sepharose pärlor. Jämfört med befintliga metoder kräver Acyl-RAC färre steg och kan ge mer tillförlitliga resultat i kombination med masspektrometri för identifiering av nya S-acylation mål. En stor begränsning i denna teknik är bristen på förmåga att diskriminera mellan fettsyra arter knutna till cysteiner via samma tiode bond.