Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay pour détermination quantitative de la palmitoylation des protéines de membrane cérébrale

Les altérations dépendantes de l’activité dans les niveaux des récepteurs synaptiques d’AMPA (AMPA) dans la densité postsynaptique (PSD) sont pensés pour représenter un mécanisme cellulaire pour l’apprentissage et la mémoire. La palmitoylation régule la localisation et la fonction de nombreuses protéines synaptiques, y compris les AMPA-R, les facteurs auxiliaires et les échafaudages synaptiques d’une manière dépendante de l’activité. Nous avons identifié la famille induite par la différenciation synapse (SynDIG) de quatre gènes (SynDIG1-4) codant des protéines transmémbranées spécifiques au cerveau qui s’associent aux AMPARs et régulent la force synapse. SynDIG1 est palmitoylated à deux résidus de cystéine situés aux positions 191 et 192 dans la région de juxta-transmembrane importante pour le développement de synapse excitatrice activité-dépendante. Ici, nous décrivons une approche biochimique innovante, l’essai de changement de gel d’échange d’acyl-PEGyl (APEGS), pour étudier l’état de palmitoylation de toute protéine d’intérêt et démontrer son utilité avec la famille SynDIG des protéines dans les lysates de cerveau de souris.