Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Analyse for kvantitativ bestemmelse av palmitoylering av hjernemembranproteiner

Aktivitetsavhengige endringer i nivåene av synaptiske AMPA-reseptorer (AMPARs) innenfor den postsynaptiske tettheten (PSD) antas å representere en cellulær mekanisme for læring og minne. Palmitoylation regulerer lokalisering og funksjon av mange synaptiske proteiner, inkludert AMPA-Rs, hjelpefaktorer og synaptiske stillas på en aktivitetsavhengig måte. Vi identifiserte synapsedifferensieringsindusertgen (SynDIG) av fire gener (SynDIG1-4) koding hjernespesifikke transmembrane proteiner som forbinder med AMPARs og regulerer synapsestyrke. SynDIG1 er palmitoylated ved to cysteinrester som ligger i stillinger 191 og 192 i den juxta-transmembrane regionen viktig for aktivitetsavhengig spenningssynapse utvikling. Her beskriver vi en innovativ biokjemisk tilnærming, acyl-PEGyl utveksling gel skift (APEGS) analyse, for å undersøke palmitoylering tilstand av noe protein av interesse og demonstrere sin nytte med SynDIG familien av proteiner i mus hjernen lysates.