उत्पादित माउस टिबियल नर्व में न्यूरोफिलमेंट परिवहन की इमेजिंग और विश्लेषण

न्यूरोफिलामेंट प्रोटीन पॉलिमर ~ 0.35-3.5 मिमी/दिन की औसत गति से अक्षीय परिवहन के धीमे घटक में अक्षों के साथ चलते हैं। हाल ही में जब तक सीटू में इस आंदोलन का अध्ययन केवल रेडियोआइसोटोपिक पल्स-लेबलिंग का उपयोग करके संभव था, जो दिनों के लौकिक संकल्प और मिलीमीटर के स्थानिक संकल्प के साथ पूरी नसों में अक्षीय परिवहन के विश्लेषण की अनुमति देता है। उच्च लौकिक और स्थानिक संकल्प के साथ सीटू में न्यूरोफिलामेंट परिवहन का अध्ययन करने के लिए, हमने एक hThy1-paGFP-NFM ट्रांसजेनिक माउस विकसित किया जो न्यूरॉन्स में फोटोएक्टिवेट जीएफपी के साथ टैग किए गए न्यूरोफिलामेंट प्रोटीन एम को व्यक्त करता है। यहां हम इन चूहों पूर्व वीवोसे टिबियल नसों के एकल माइलिनेटेड एक्सॉन में न्यूरोफिलामेंट परिवहन का विश्लेषण करने के लिए फ्लोरेसेंस फोटोएक्टिवेशन पल्स-एस्केप और पल्स-स्प्रेड विधियों का वर्णन करते हैं। आइसोलेटेड तंत्रिका खंडों को माइक्रोस्कोप चरण पर ऑक्सीजनयुक्त खारा के साथ परफ्यूजन द्वारा बनाए रखा जाता है और डिस्क कंफोकल फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी कताई द्वारा चित्रित किया जाता है। वायलेट लाइट का उपयोग एक छोटी अक्षीय खिड़की में फ्लोरेसेंस को सक्रिय करने के लिए किया जाता है। सक्रिय और फ्लैंकिंग क्षेत्रों में फ्लोरेसेंस का विश्लेषण समय के साथ किया जाता है, जो क्रमशः मिनट और माइक्रोन के क्रम पर लौकिक और स्थानिक संकल्प के साथ न्यूरोफिलामेंट परिवहन के अध्ययन की अनुमति देता है। गणितीय मॉडलिंग का उपयोग न्यूरोफिलामेंट परिवहन के गतिज मापदंडों को निकालने के लिए किया जा सकता है जिसमें वेग, दिशात्मक पूर्वाग्रह और परिणामस्वरूप डेटा से रुके हुए व्यवहार शामिल हैं। नाड़ी-भागने और नाड़ी फैलाने के तरीकों को अन्य नसों में न्यूरोफिलामेंट परिवहन की कल्पना करने के लिए भी अनुकूलित किया जा सकता है। अतिरिक्त ट्रांसजेनिक चूहों के विकास के साथ, इन तरीकों का उपयोग एक्सॉन में अन्य साइटोस्केलेल और साइटोसोलिक प्रोटीन के अक्षीय परिवहन को छवि और विश्लेषण करने के लिए भी किया जा सकता है।