हिस्टोन एसिटिलट्रांसफेरेज अवरोधकों को मान्य करने के लिए परखें

लिसाइन एसिटाइलट्रांसफेरेसेस (KATs) क्रोमेटिन गतिशीलता और जीन अभिव्यक्ति को विनियमित करने के लिए हिस्टन और अन्य प्रोटीन पर लिसाइन अवशेषों के एसीटिलेशन को उत्प्रेरित करता है। सीबीपी/पी300 जैसे KATs, विविध कैंसर के ट्यूमरजीनेसिस में उनकी महत्वपूर्ण भूमिका के कारण चिकित्सीय लक्ष्यों के रूप में गहन जांच के अधीन हैं । KATs के हिस्टोन एसिटाइलट्रांसफेरेज (हैट) समारोह को लक्षित करने वाले उपन्यास छोटे अणु अवरोधकों का विकास चुनौतीपूर्ण है और इसके लिए मजबूत परख की आवश्यकता है जो संभावित अवरोधकों की विशिष्टता और शक्ति को मान्य कर सकते हैं।

यह लेख तीन तरीकों की एक पाइपलाइन को रेखांकित करता है जो उपन्यास हैट अवरोधकों (HATI) के लिए कठोर इन विट्रो सत्यापन प्रदान करते हैं। इन तरीकों में एक टेस्ट ट्यूब हैट परख, क्रोमेटिन हाइपरसेटिलेशन अवरोध (सीएचएई) परख, और क्रोमेटिन इम्यूनोप्रिपेशन-मात्रात्मक पीसीआर (ChIP-qPCR) शामिल हैं। हैट परख में, एक टेस्ट ट्यूब प्रतिक्रिया में हिस्टोन के साथ फिर से संयोजन किया जाता है, जो हिस्टोन पूंछ पर विशिष्ट lysine अवशेषों के एसीटिलेशन के लिए अनुमति देता है। इस प्रतिक्रिया को एक HATI द्वारा अवरुद्ध किया जा सकता है और साइट-विशिष्ट हिस्टोन एसिटिलेशन के सापेक्ष स्तर को इम्यूनोब्लोटिंग के माध्यम से मापा जा सकता है। टोपी परख में पहचाने गए अवरोधकों को सेलुलर वातावरण में पुष्टि करने की आवश्यकता है।

ChHAI परख उपन्यास HATI के लिए स्क्रीन करने के लिए इम्यूनोब्लोटिंग का उपयोग करता है जो एक हिस्टोन डेसेटाइलेस अवरोधक (एचडीएसीआई) द्वारा प्रेरित हस्टटोन के मजबूत हाइपरसेटाइलेशन को कम करता है। एचडीएसीआई के अलावा सहायक है क्योंकि हिस्टोन एसिटिलेशन के बेसल स्तर इम्यूनोब्लोटिंग के माध्यम से पता लगाने के लिए मुश्किल हो सकता है।

हैट और सीएचई का कहना है कि हिस्टोन एसिटिलेशन में वैश्विक परिवर्तनों को मापता है, लेकिन विशिष्ट जीनोमिक क्षेत्रों में एसीटिलेशन के बारे में जानकारी प्रदान नहीं करते हैं। इसलिए, जीन नियामक तत्वों पर हिस्टोन एसिटिलेशन स्तरों पर एचएटीआई के प्रभावों की जांच करने के लिए छग-क्यूपीसीआर का उपयोग किया जाता है। यह हिस्टोन-डीएनए परिसरों के चयनात्मक इम्यूनोप्रिपिटेशन और क्यूपीसीआर के माध्यम से शुद्ध डीएनए के विश्लेषण के माध्यम से पूरा किया जाता है। साथ में, ये तीन परख उपन्यास हैटी की विशिष्टता, शक्ति और कार्रवाई के तंत्र के सावधानीपूर्वक सत्यापन की अनुमति देते हैं।