CRISPR-Cas9-Vermittelte Genombearbeitung in der filamentösen Ascomycete Huntiella omanensis

Das CRISPR-Cas9 Genom-Editing-System ist ein molekulares Werkzeug, das verwendet werden kann, um präzise Veränderungen in die Genome von Modell- und Nicht-Modellarten gleichermaßen einzuführen. Diese Technologie kann für eine Vielzahl von Genom-Editing-Ansätzen verwendet werden, von Gen Knockouts und Knockins bis hin zu spezifischeren Veränderungen wie der Einführung einiger Nukleotide an einem gezielten Ort. Die Genombearbeitung kann für eine Vielzahl von Anwendungen eingesetzt werden, einschließlich der partiellen funktionellen Charakterisierung von Genen, der Produktion transgener Organismen und der Entwicklung diagnostischer Werkzeuge. Im Vergleich zu den bisher verfügbaren Gen-Editing-Strategien hat sich gezeigt, dass das CRISPR-Cas9-System sich bei neuen Arten leicht etablieren lässt und eine hohe Effizienz und Spezifität bietet. Der Hauptgrund dafür ist, dass das Bearbeitungswerkzeug ein RNA-Molekül verwendet, um das Gen oder die Sequenz von Interesse zu zielen, was das Design von Zielmolekülen einfach macht, da Standard-Basenpaarungsregeln genutzt werden können. Ähnlich wie andere Genom-Editing-Systeme erfordern CRISPR-Cas9-basierte Methoden auch effiziente und effektive Transformationsprotokolle sowie Zugang zu qualitativ hochwertigen Sequenzdaten für die Gestaltung der Ziel-RNA- und DNA-Moleküle. Seit der Einführung dieses Systems im Jahr 2013, Es wurde verwendet, um eine Vielzahl von Modellarten zu gentechnisch verändert, einschließlich Saccharomyces cerevisiae, Arabidopsis thaliana, Drosophila melanogaster und Mus musculus. In der Folge haben Forscher, die an Nicht-Modell-Arten arbeiten, das System genutzt und es für die Untersuchung von Genen genutzt, die an so unterschiedlichen Prozessen wie dem Sekundärstoffwechsel bei Pilzen, Demematodenwachstum und Krankheitsresistenz in Pflanzen beteiligt sind, unter anderem. Dieses unten aufgeführte Protokoll beschreibt die Verwendung des CRISPR-Cas9-Genom-Editing-Protokolls zur Kürzung eines Gens, das am Sexualzyklus von Huntiella omanensisbeteiligt ist, einem fadenförmigen Ascomycete-Pilz, der zur Familie der Ceratocystidaceae gehört.