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Biochemistry

परिपक्व चावल के अनुप्रस्थ विभाजन(Oryza sativa एल.) स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी इमेजिंग के लिए कर्नेल्स स्थिरीकरण समर्थन के रूप में पिपेट युक्तियाँ का उपयोग कर

Published: January 25th, 2022

DOI:

10.3791/61407

1Department of Biochemistry, Microbiology, and Immunology, University of Ottawa, 2Proteins Easy Corp

Abstract

स्टार्च ग्रैन्यूल्स (एसजी) पौधे की प्रजातियों के आधार पर विभिन्न आकारिकी प्रदर्शित करते हैं, विशेष रूप से पोएसी परिवार के एंडोस्पर्म में। एंडोस्पर्म फेनोटाइपिंग का उपयोग स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपिक (एसईएम) विश्लेषण का उपयोग करके एसजी मोर्फोटाइप के आधार पर जीनोटाइप को वर्गीकृत करने के लिए किया जा सकता है। एसजी को कर्नेल (पेरिकार्प, एल्यूरोन परतों, और एंडोस्पर्म) के माध्यम से स्लाइसिंग करके और ऑर्गेनेलर सामग्री को उजागर करके एसईएम का उपयोग करके कल्पना की जा सकती है। वर्तमान विधियों के लिए चावल कर्नेल को प्लास्टिक राल में एम्बेडेड करने की आवश्यकता होती है और एक माइक्रोटोम का उपयोग करके विभाजित किया जाता है या एक कटे हुए पिपेट टिप में एम्बेडेड किया जाता है और रेजर ब्लेड का उपयोग करके हाथ से विभाजित किया जाता है। पूर्व विधि के लिए विशेष उपकरणों की आवश्यकता होती है और यह समय लेने वाली होती है, जबकि उत्तरार्द्ध चावल जीनोटाइप के आधार पर समस्याओं का एक नया मेजबान पेश करता है। चॉकी चावल की किस्में, विशेष रूप से, उनके एंडोस्पर्म ऊतक की friable प्रकृति के कारण इस प्रकार के सेक्शनिंग के लिए एक समस्या पैदा करती हैं। यहां प्रस्तुत माइक्रोस्कोपी के लिए पारभासी और चॉकी चावल कर्नेल वर्गों को तैयार करने के लिए एक तकनीक है, जिसमें केवल पिपेट टिप्स और एक स्केलपेल ब्लेड की आवश्यकता होती है। एक पिपेट टिप की सीमाओं के भीतर वर्गों को तैयार करना चावल कर्नेल एंडोस्पर्म को टूटने से रोकता है (पारभासी या 'विट्रियस' फेनोटाइप के लिए) और ढहने (चॉकी फेनोटाइप के लिए)। इस तकनीक का उपयोग करते हुए, एंडोस्पर्म सेल पैटर्निंग और बरकरार एसजी की संरचना को देखा जा सकता है।

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