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Abstract

Bioengineering

甲基化特异性多路复用液滴PCR,使用聚合物液滴发生器设备进行血液诊断

Published: June 29th, 2020

DOI:

10.3791/61421

1Life Sciences Division, National Research Council of Canada, 2Galenvs Sciences, Inc.

Abstract

介绍了多路复用液滴PCR (mdPCR) 工作流程和用于确定基于表观遗传的白血球 (WBC) 差分计数的详细协议,以及热塑性弹性体 (TPE) 微流体液滴生成装置。表观遗传标记用于WBC亚标,在不同疾病中具有重要的预后价值。这是通过量化基因组中特定CG富产区的DNA甲基化模式(CpG位) 实现的。本文将外周血单核细胞(PBMC)的二硫酮处理DNA封装在液滴中,包括与WBC亚群相关的PPC根酸基点特异性的底土剂和水解荧光探针等mdPCR试剂。多路复用方法允许对许多CpG位点进行检测,而无需单独的mdPCR反应,从而利用甲基化位点表观遗传分析,更准确地对WBC子种群进行参数测定。这种精确的定量可以扩展到不同的应用,并突出临床诊断和后续预后的好处。

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