Évaluation de l’expression du complexe majeur d’histocompatibilité de classe I sur les neurones primaires de l’hippocampe murin par cytométrie en flux

Les preuves croissantes soutiennent l’hypothèse que les interactions neuro-immunes ont un impact sur le fonctionnement du système nerveux dans des conditions homéostatiques et pathologiques. Une fonction bien étudiée de la classe I (MHCI) du complexe majeur d’histocompatibilité est la présentation des peptides cellule-dérivés au système immunitaire adaptatif, en particulier en réponse à l’infection. Plus récemment, il a été démontré que l’expression des molécules MHCI sur les neurones peut moduler les changements dépendant de l’activité de la connectivité synaptique pendant le développement normal et les troubles neurologiques. L’importance de ces fonctions pour la santé du cerveau soutient la nécessité d’un essai sensible qui détecte facilement l’expression de MHCI sur les neurones. Ici nous décrivons une méthode pour la culture primaire des neurones hippocampal murins et puis l’évaluation de l’expression de MHCI par analyse cytometric d’écoulement. L’hippocampe murin est microdisséqué des petits de souris prénatals au jour embryonnaire 18. Le tissu est dissocié en une seule suspension cellulaire à l’aide de techniques enzymatiques et mécaniques, puis cultivé dans un milieu sans sérum qui limite la croissance des cellules non neuronales. Après 7 jours in vitro, l’expression de MHCI est stimulée en traitant pharmacologiquement les cellules cultivées avec le bêta interféron. Les molécules MHCI sont marquées in situ avec un anticorps marqué par fluorescence, puis les cellules sont dissociées de manière non enzymatique en une seule suspension cellulaire. Pour confirmer l’identité neuronale, les cellules sont fixées avec du paraformaldéhyde, perméabilisées et marquées avec un anticorps marqué par fluorescence qui reconnaît l’antigène nucléaire neuronal NeuN. L’expression de la MHCI est ensuite quantifiée sur les neurones par analyse cytométrique en flux. Les cultures neuronales peuvent facilement être manipulées par des modifications génétiques ou des interventions pharmacologiques pour tester des hypothèses spécifiques. Avec de légères modifications, ces méthodes peuvent être utilisées pour culturer d’autres populations neuronales ou pour évaluer l’expression d’autres protéines d’intérêt.