שיטת UPLC-UV משופרת לכימות ויטמין C בזני חסה(לקטוקה סאטיבה L.) וקרובי משפחה פראיים(Lactuca spp.)

ויטמינים, במיוחד ויטמין C, הם מיקרונוטריינטים חשובים שנמצאו בפירות וירקות. ויטמין C הוא גם תורם מרכזי ליכולת נוגדת החמצון שלהם. חסה הוא אחד הירקות הפופולריים ביותר בקרב צרכנים ברחבי העולם. פרוטוקול מדויק למדיסת תכולת ויטמין C חסה ומינים קשורים אחרים הוא קריטי. אנו מתארים כאן שיטה באמצעות אולטרה ביצועים גבוהים נוזלי כרומטוגרפיה אולטרה סגול (UPLC-UV) טכניקה, שבו הכנת מדגם, מיצוי ויטמין ותנאי כרומטוגרפיה היו אופטימיזציה.

דגימות נאספו כדי לייצג את הצמח כולו, קפוא ב -80 מעלות צלזיוס וlyophilized כדי למנוע חמצון לא רצוי והפוך את המניפולציה שלהם קלה יותר. החילוץ של ויטמין C בוצע בתקשורת חומצית, אשר גם תרם ליציבותו. כמו ויטמין C יכול להיות נוכח בשתי צורות שונות interconvertible, חומצה אסקורבית (AA) וחומצה dehydroascorbic (DHAA), שתי התרכובות יש למדוד לכמת מדויק. DHAA היה לכמת בעקיפין לאחר ההפחתה שלה AA כי AA מראה ספיגה גבוהה יותר מאשר DHAA בטווח UV של הספקטרום. מאותה תמצית בוצעו שתי מדידות, אחת לפני והשנייה לאחר אותה תגובת הפחתה. במקרה הראשון, כימתנו את תוכן ה-AA, ובמקרה השני כימתנו את הסכום של AA ו-DHAA (TAA: חומצה אסקורבית מוחלטת) בצורה של AA. לאחר מכן, כמות DHAA הושגה בעקיפין על ידי חיסור AA מגיע מהמדידה הראשונה מת"א. הם נקבעו על ידי UPLC-UV, באמצעות תקן AA מסחרי כדי לבנות עקומת כיול ולייטוב ההליך הכרומטוגרפי, כדי להשיג פסגות AA שנפתרו לחלוטין בזמן קצר. פרוטוקול זה יכול להיות מוערך בקלות לכל חומר צמח אחר עם שינויים קלים או ללא שינויים. הדיוק שלו חשף הבדלים משמעותיים סטטיסטית שלא ניתן היה יהיה להם. חוזקות ומגבלות אחרות נדונים לעומק בכתב היד.