使用胸苷类似物BrdU分析大鼠细胞增殖和神经发生的免疫组织化学技术

成人海马神经发生（AHN）领域最重要的事情之一是识别新生成的细胞。胸苷类似物（如5-溴-2'-脱氧尿苷（BrdU））的免疫检测是用于可视化这些新生成的细胞的标准技术。因此，BrdU通常在小动物腹膜内注射，因此胸苷类似物在DNA合成过程中被掺入分裂细胞中。通过脑切片的免疫组织化学分析进行检测。每个使用这种技术的研究小组都可以体会到，它需要特别注意微小的细节才能获得成功的染色。例如，一个重要的步骤是用HCl使DNA变性，这允许它到达细胞核对其进行染色。然而，现有的科学报告很少详细描述这些步骤。因此，标准化该技术对于新实验室来说具有挑战性，因为可能需要几个月的时间才能产生积极和成功的结果。这项工作的目的是描述和阐述在使用胸苷类似物BrdU时获得免疫染色技术的积极和成功结果的步骤。该方案包括试剂制备和设置、在啮齿动物中给予胸苷类似物、经心灌注、组织制备、过氧化物酶免疫组织化学反应、亲和素-生物素复合物的使用、免疫荧光、复染、显微镜成像和细胞分析。