חשיפת תפקידם של אזורים נפרדים במוח העכברוש בוויסות הביוץ באמצעות אי-פעילות הפיכה על ידי מיקרו-גניזמים של טטרודוטוקסין

Summary

פרוטוקול זה מתאר את בנייתה של מערכת מיקרו-הפעלה בעלות נמוכה, את ההשתלה הסטריאוטקסית שלה לתוך מבנים עמוקים במוח ואת ההליך למיקרו-נג'קציה מתוזמנות של טטרודוטוקסין בחולדות ערות וחסרות מעצורים. המטרה היא לחשוף את ההשתתפות של מבנים היפותלמיים ברגולציה של הביוץ על ידי עיכוב הפעילות העצבית שלהם.

Abstract

גישות ניסיוניות רבות שימשו לחקר תפקיד המוח בוויסות הביוץ. דוגמאות כוללות את הנגע ואת חירשות של קבוצות עצביות, שהן שתי שיטות פולשניות שפוגעות לצמיתות בשלמות אזור היעד. שיטות אלה מלוות בהשפעות בטחונות שיכולות להשפיע על ניתוח מנגנוני רגולציה חריפים וטמפורליים. ההשתלה הסטריאוטקסית של קנולות מדריך המכוונות לאזורי מוח ספציפיים, ואחריה תקופת התאוששות, מאפשרת לחוקרים למיקרו-זרם תרופות שונות לאחר היעלמות ההשפעות הבלתי רצויות של הניתוח. Tetrodotoxin שימש כדי לקבוע את התפקידים של מספר אזורי מוח בתהליכים פיזיולוגיים מגוונים כי זה מעכב באופן חולף את פוטנציאל הפעולה תלוי נתרן, ובכך חוסם את כל הפעילות העצבית באזור היעד. פרוטוקול זה משלב שיטה זו עם אסטרטגיות להערכת מחזור estrous וביוץ כדי לחשוף את התפקיד של אזורי מוח נפרדים בוויסות הביוץ בזמנים מסוימים של כל שלב נתון של מחזור אסטרוס. חולדות ערות וחסרות מעצורים (Rattus norvegicus) שימשו כדי למנוע את השפעות החסימה כי הרדמה והורמוני מתח להפעיל על הביוץ. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם בקלות למינים אחרים, מטרות המוח וסוכנים פרמקולוגיים ללמוד תהליכים פיזיולוגיים שונים. שיפורים עתידיים בשיטה זו כוללים את העיצוב של מערכת microinjection באמצעות נימים זכוכית בקוטר קטן במקום קנולות מדריך. זה יפחית את כמות הרקמה שניזוקה במהלך ההשתלה ויפחית את התפשטות התרופות המושרות מחוץ לאזור היעד.

Introduction

הביוץ הוא התהליך שבו ביציות בוגרות אחת או יותר משתחררות מהשחלות אחת ל-estral/מחזור החודשי. מכיוון שכל מיני היונקים תלויים בייצור הגמטים להתרבות, להבנת המנגנונים המסדירים את הביוץ יש השפעה עצומה בתחומים החל מביו-רפואה, תעשיית בעלי החיים ותחזוקת מינים בסכנת הכחדה. הביוץ מוסדר על ידי ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-השחלות, אשר כרוך במספר אזורים היפותלמיים ואקסטרה-ההיפותלמיים, הגונדוטרופים בבלוטת יותרת המוח העורפית והתקה ותאי הגרנולוזה, יחד עם הביצים, יוצרים את זקיקי השחלות בתוך השחלות¹.

זקיקי השחלות לגדול, לפתח ובסופו של דבר לביוץ בתגובה הפרשת טוניק פאזי של ההורמון מגרה זקיק ואת ההורמון נוהם, שני גונדוטרופינים מופרש על ידי go....

Protocol

הליכים הנוגעים לבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה של הפקולטה של הפקולטה לסוסות סרגוס סרגוסה, UNAM. מוסד זה פועל בהתאם לחוקים המקסיקניים לטיפול בבעלי חיים, נורמה רשמית: NOM-062-ZOO-1999, אשר מסכים עם הנחיות בינלאומיות.

1. בניית קנולס דו-צדדיות

1. לחלץ את פיר נירוסטה מהרכזת של שתי מחטים hypodermic 23 G באמצעות פינצטה לחץ ולאחר מכן להסיר כל דבק שנותר באמצעות להב אזמל.
2. צייר קו 15 מ"מ מלבד הקצה הקהה של הפירים עם סמן קבוע בסדר. השתמש פינצטה חיתוך כדי להסיר את הקצוות משופעים.
3. החזק את מקטעי 15 מ"מ עם hemostats בסדר ולחץ עליהם בניצב עם דיסק מנותק מחובר לכלי מסתובב עד 14 מ"מ קטעים של צינורות מתקבלים. צעד זה נעשה על מנת לחס....

תוצאות

הפרוטוקול שתואר לעיל נבדק על ידי הערכת ההשפעות של TTX יחיד או רכב (נוזל השדרתי מלאכותי; ACSF) מיקרו-ג'ק-קציה לאחד משני גרעינים שונים הידועים כמעורבים בוויסות הביוץ בחולדה: הסופרכיאסמטי וגרעין הארקואט. הגרעין הדו-על-פראציאזמטי נבחר מכיוון שהוא מכיל את קוצב הלב הביולוגי המרכזי ביונקים. הוא מעור?.......

Discussion

מאמר זה מתאר שיטה לנטרל באופן חולף, בכל זמן נתון, אזור נפרד במוחם של חולדות ערות וחסרות מעצורים. שיטה פשוטה כדי לעקוב אחר מחזור estrous שלהם ולהעריך ביוץ מסופק גם. פרוטוקול זה מאפשר ניתוח פשוט של תרומתם של אזורי מוח ספציפיים למנגנונים המניעים ביוץ על ידי השוואת התוצאה הביוץ של בעלי חיים שטופלו .......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
10 μL Hamilton syringes	Hamilton	80314
21 G x 1" stainless steel hypdermic needle	BD	305165
23 G x 1" stainless steel hypdermic needle	BD	305145
30 G x 1/2" stainless steel hypdermic needle	BD	305106
Artificial cerebrospinal fluid	BASi	MD-2400
Bone trimer	Fine Science Tools	16152-12
Burr for micro drill	Fine Science Tools	19007-05
Clipper	Wahl
Cut-off disc	Dremel	SM5010
Cutting tweezers	Truper	17367
Cyanocrylate glue	Kola loka	K-1
Dental cement	Nic Tone
Enrofloxasin	Senosiain
Eosin	Sigma	E4009
Estereoscope	Zeiss
Extra fine Bonn scissors	Fine Science Tools	14084-08
Face mask	Lanceta HG	60036
Graefe Forceps	Fine Science Tools	11050-10
Hematoxilin	Sigma	H3136
Hemostats	Fine Science Tools	13008-12
Hot bead sterilizer	Fine Science Tools	18000-45
Hydrochloric acid	Sigma	320331
Hypromelose artificial tears	Sophia Labs	8950015
Isoflurane	Pisa Agropecuaria
Meloxicam	Aranda	1183
Microinjection pump	KD Scientific	788380
Monomer	Nic Tone
Mototool	Dremel	3000
Nitrile gloves	Lanceta HG	69028
Non-Rupture Ear Bars	David Kopf Instruments	855
Poly-L lysine	Sigma	P4707
Povidone-iodine	Dermo Dine
Povidone-iodine with soap	Germisin espuma
Pressure tweezers	Truper	17371
Rat anesthesia mask	David Kopf Instruments	Model 906
Saline solution	PISA
Scalpel	Fine Science Tools	10004-13
Scalpel blade	Fine Science Tools	10015-00
Sodium pentobarbital	Pisa Agropecuaria
Standard electrode holder	David Kopf Instruments	1770
Stainless steel wire	American Orthodontic	856-612
Stereotaxic apparatus	David Kopf Instruments	Model 900LS
Surgical Sissors	Fine Science Tools	14001-12
Teflon connectors	Basi	MD-1510
Teflon tubing	Basi	MF-5164
Tetrodotoxin	Alomone labs	T-500
Vaporizer	Kent scientific	VetFlo