In Vitro Utvärdering av Oncogenic Transformation i mänskliga mammary Epitelial celler

Tumorigenesis är en flerstegsprocess där celler förvärva kapacitet som tillåter deras tillväxt, överlevnad, och spridning under fientliga förhållanden. Olika tester försöker identifiera och kvantifiera dessa kännetecken för cancerceller; emellertid, de fokuserar ofta på en enda aspekt av cellulära omvandling och, i själva verket, flera tester krävs för deras korrekt karakterisering. Syftet med detta arbete är att ge forskarna en uppsättning verktyg för att bedöma cellulär transformation in vitro ur ett brett perspektiv och därigenom göra det möjligt att dra sunda slutsatser.

En ihållande proliferative signalering aktivering är den viktigaste funktionen för tumoral vävnader och kan lätt övervakas under in vitro-förhållanden genom att beräkna antalet befolkningen fördubblingar uppnås över tiden. Förutom, tillväxten av celler i 3D-kulturer tillåter deras interaktion med omgivande celler, som liknar vad som sker in vivo. Detta möjliggör utvärdering av cellulära aggregering och, tillsammans med immunofluorescent märkning av särskiljande cellulära markörer, att få information om en annan relevant egenskap av tumoral omvandling: förlusten av korrekt organisation. En annan anmärkningsvärd egenskap hos transformerade celler är deras förmåga att växa utan fastsättning till andra celler och till den extracellulära matrisen, som kan utvärderas med förankringsanalysen.

Detaljerade experimentella förfaranden för att utvärdera celltillväxthastighet, att utföra immunofluorescent märkning av cell härstamning markörer i 3D kulturer, och att testa förankringsoberoende celltillväxt i mjuk agar tillhandahålls. Dessa metoder är optimerade för Breast Primary Epitelial Cells (BPEC) på grund av dess relevans vid bröstcancer; kan dock procedurer tillämpas på andra celltyper efter vissa justeringar.