Identifisering, isolasjon og karakterisering av Fibro-Adipogenic Progenitors (FAPs) og Myogenic Progenitors (MPs) i skjelettmuskulaturen i rotten

Fibro-adipogenic Progenitors (FAPs) er bosatt interstitiale celler i skjelettmuskulatur som sammen med myogene forfedre (MPs) spiller en nøkkelrolle i muskel homeostase, skade og reparasjon. Gjeldende protokoller for FAPs identifikasjon og isolasjon bruker strømningscytometri/fluorescensaktivert cellesortering (FACS) og studier som evaluerer deres funksjon in vivo til dags dato har blitt utført utelukkende hos mus. Den større iboende størrelsen på rotten gir mulighet for en mer omfattende analyse av FAPs i skjelettmuskulaturskademodeller, spesielt i alvorlig atrofisk muskel eller når etterforskere krever betydelig vevsmasse for å gjennomføre flere nedstrømsanalyser. Rotten gir i tillegg et større utvalg av muskelfunksjonelle analyser som ikke krever dyresedasjon eller offer, og dermed minimerer sykelighet og dyrebruk ved å muliggjøre serievurderinger. Strømningscytometri/FACS-protokollene som er optimalisert for mus er artsspesifikke, spesielt begrenset av egenskapene til kommersielt tilgjengelige antistoffer. De har ikke blitt optimalisert for å skille FAPs fra rotte eller svært fibrotisk muskel. En strømningscytometri/FACS-protokoll for identifisering og isolering av FAPer og MPs fra både sunn og denervated rotte skjelettmuskulatur ble utviklet, avhengig av differensialuttrykket til overflatemarkører CD31, CD45, Sca-1 og VCAM-1. Ettersom rottespesifikke, strømningscytometri-validerte primære antistoffer er sterkt begrenset, ble intern konjugering av antistoffet rettet mot Sca-1 utført. Ved hjelp av denne protokollen ble vellykket Sca-1-konjugering bekreftet, og strømningscytometrisk identifikasjon av FAPer og MPs ble validert av cellekultur og immunisering av FACS-isolerte FAPer og MPs. Til slutt rapporterer vi et nytt FAPs-tidskurs i en langvarig (14 uker) rottefornektermodell. Denne metoden gir etterforskerne muligheten til å studere FAPs i en ny dyremodell.