从脂质绑定蛋白和过敏原中去除和替换内源性利根

许多主要过敏原与疏水性脂质状分子结合，包括Mus m 1、Bet v 1、Der p 2和Fel d 1。这些配体被强烈保留，并有可能通过直接刺激免疫系统或改变过敏蛋白的生物物理特性来影响敏感过程。为了控制这些变量，需要技术来去除内源性绑定配体，并在必要时用已知成分的脂质代替。蟑螂过敏原Bla g 1封闭了一个大的疏水腔，在使用传统技术纯化时结合了异质内源性脂质的混合物。在这里，我们描述了一种方法，通过这种方法，这些脂质被删除使用反相HPLC，然后热退化产生Bla g 1在其Apo形式或重新加载与用户定义的脂肪酸或磷脂货物的混合物。将该协议与生化检测结果结合，可显著改变Bla g 1的恒温性和蛋白解电阻，对T细胞表位生成速率和过敏性有下游影响。这些结果突出了脂质去除/重新加载协议的重要性，例如在研究来自重组源和自然来源的过敏原时所述的协议。该协议可推广到其他过敏原家族，包括脂蛋白（Mus m 1）、PR-10（投注 v 1）、MD-2（Der p 2）和乌特罗蛋白（Fel d 1），为研究脂质在过敏反应中的作用提供了宝贵的工具。