Konberikade kulturer från näthinnan av kycklingembryon för att studera stång till kon cellulära interaktioner

Människans dagtidsvision förlitar sig på funktionen hos konfotoreceptorer i mitten av näthinnan, fovean. Patienter som lider av den vanligaste formen av ärvd retinal degeneration, retinitis pigmentosa, förlorar mörkerseende på grund av mutation driven förlust av stång fotoreceptorer, ett fenomen följt av en progressiv förlust av funktion och död av koner leder till blindhet. Genetiker har identifierat många gener med mutationer som orsakar denna sjukdom, men de första mutationerna som identifierats ifrågasatte mekanismerna för sekundär kondegeneration och hur en dominerande mutation i rhodopsin genkodning för det visuella pigmentet uttryckt uteslutande i stavar kan utlösa kon degeneration.

Detta resultat av transplantationer i en genetisk modell av sjukdomen ledde till begreppet cellinteraktioner mellan stavar och koner och av icke-cells autonom degenerering av koner i alla genetiska former av retinitis pigmentosa.

Kottar utgör 5% av alla fotoreceptorer hos människor och endast 3% i musen, så deras studie är svår i dessa arter, men koner är fler än stavar hos fågelarter. Vi har anpassat 96-brunnsplattor till kultur retinal prekursorer från näthinnan hos kycklingembryon i steg 29 av deras utveckling. I dessa primära kulturer representerar koner 80% av cellerna efter in vitro-differentiering. Cellerna degenereras under en period av en vecka i avsaknad av serum. Här beskriver vi metoderna och dess standardisering.

Detta konberikade odlingssystem användes för att identifiera epitel-härledda cone viability faktor (EdCVF) genom hög innehåll screening av en råtta retinal pigmenterade epitel normaliserade cDNA bibliotek. Rekombinant EdCVF förhindrar degenerering av konerna.