نشكر الدكتور يون شو على مساعدتها كممثل صوت، والدكتور ميد جيانهوا بنغ لمساعدتها في تحرير الفيديو، والدكتورة أنيكا كوكهان على تعليقاتها ودعمها. وقد تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل مؤسسة البحوث الألمانية (DFG) لتعزيز التعاون الدولي (HO2581/4-1 إلى AH)، والمؤسسة الوطنية للعلوم في الصين (NSFC؛ #81760291 إلى FJ).

وأجريت جميع التجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية الواردة في التوجيه 2010/63/EU للبرلمان الأوروبي بشأن حماية الحيوانات المستخدمة لأغراض علمية (وافقت لجنة الأخلاقيات، #G1071/09).
ملاحظة: التحضير الأولي والتخدير والرعاية بعد الجراحة وأعمال المراقبة هي نفسها التي يتم إجراؤها...

<ol>
	<li>Corry, R., Winn, H., Russell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+heart+in+mice.">Primarily vascularized allografts of heart in mice.</a> Transplantation. 16, 343-350 (1973).</li><li>Habertheuer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+tissue-specific+exosome+profiling+enables+noninvasive+monitoring+of+acute+rejection+in+mouse+allogeneic+heart+transplantation.">Donor tissue-specific exosome profiling enables noninvasive monitoring of acute rejection in mouse allogeneic heart transplantation.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 155 (6), 2479-2489 (2018).</li><li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse.">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> Journal of Investigative Surgery. 26, 223-228 (2013).</li><li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+technique+for+blood+circuit+reconstruction+in+mouse+heart+transplantation+model.">Novel technique for blood circuit reconstruction in mouse heart transplantation model.</a> Microsurgery. 26, 594-598 (2006).</li><li>Alamran, F. G., Shahkolahi, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+arterial+anastomosis+heterotopic+heart+transplantation+model.">Total arterial anastomosis heterotopic heart transplantation model.</a> Transplantation Proceedings. 45, 625-629 (2013).</li><li>Melanie, L., et al., Moffatt-Bruce, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+of+Heterotopic+Cardiac+Transplantation+in+Mice+as+a+Model+for+Elucidating+Mechanisms+of+Graft+Rejection.">Potential of Heterotopic Cardiac Transplantation in Mice as a Model for Elucidating Mechanisms of Graft Rejection.</a> Cardiac Transplantation. , (2012).</li><li>Westhofen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heterotopic+heart+transplantation+in+mice+as+a+small+animal+model+to+study+mechanical+unloading+-+Establishment+of+the+procedure,+perioperative+management+and+postoperative+scoring.">The heterotopic heart transplantation in mice as a small animal model to study mechanical unloading - Establishment of the procedure, perioperative management and postoperative scoring.</a> PLoS One. 14 (4), 0214513 (2019).</li><li>Wang, C., Wang, Z., Allen, R., Bishop, G. A., Sharland, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modified+Method+for+Heterotopic+Mouse+Heart+Transplantion.">A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e51423 (2014).</li><li>Mokbel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate+Solution+for+Donor+Heart+Preservation+Is+Safe+for+Transplantation.">Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate Solution for Donor Heart Preservation Is Safe for Transplantation.</a> Annals of Thoracic Surgery. 109 (3), 763-770 (2020).</li><li>Song, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+Suture+Technique+in+a+Mouse+Heart+Transplant+Model.">Modified Suture Technique in a Mouse Heart Transplant Model.</a> Asian Journal of Surgery. 34 (2), 86-91 (2011).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+graft+function+in+rodent+models+of+heart+transplantation.">Assessment of graft function in rodent models of heart transplantation.</a> Microsurgery. 28 (7), 565-570 (2008).</li><li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cold+storage+using+a+new+histidine-tryptophan-ketoglutarate-based+preservation+solution+in+isogeneic+cardiac+mouse+grafts.">cold storage using a new histidine-tryptophan-ketoglutarate-based preservation solution in isogeneic cardiac mouse grafts.</a> European Heart Journal. 32 (4), 509-516 (2011).</li><li>T&#252;rk, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+chronic+graft+injury+with+a+new+HTK-based+preservation+solution+in+a+murine+heart+transplantation+model.">Reduction of chronic graft injury with a new HTK-based preservation solution in a murine heart transplantation model.</a> Cryobiology. 64 (3), 273-278 (2012).</li></ol>

التقنية الجراحية لزرع القلب البطني النظائري في الفئران صعبة للغاية وهذا ينطوي على تقييد للاستخدام الواسع النطاق لهذا النموذج.
أحد عيوب التقنية التقليدية هو الحد من طول الشريان الرئوي للمتبرع (PA). وعادة ما يكون طوله حوالي 2 مم، في حين أن طول IIVC للقلب المتبرع المستخدم في نموذج...

تمثل التقنية الجراحية لزرع قلب البطن النظائري في الفئران نموذجا قياسيا للأبحاث في علم المناعة زرع1،2،3. ومع ذلك، فإنه من الصعب جدا لأداء وهذا ينطوي على تقييد لاستخدام واسع النطاق لهذا النموذج4،5.
في زرع قلب الفأر التقليدي (THTx) ، يتم أنستوموستيد الشريان الأورطي المانح والمتلقي الشريان الأورطي البطني بينما الشريان الرئوي هو anastomosed إلى المتلقي السفلي الوريد كافا6،7،8.
في هذه التقنية المعدلة زرع قلب الفأر، هو anastomosed الشريان الأورطي المانحة إلى الشريان الأورطي البطن المتلقي والمتبرع IIVC هو anastomosed إلى المتلقي السفلي الوريد كافا(3،4،6) ( الشكل2 والشكل 3).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>30G-needles</td>
			<td>Braun</td>
			<td>456300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acepromazine</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Tranquisol P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c AnNCrl mice</td>
			<td>Charles River. Germany</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen eye ointment</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 01578675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11083-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Box for insulation and oxygen supply device</td>
			<td>RUSKINN</td>
			<td>INVIV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J&#160; mice</td>
			<td>Charles River. Germany</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>Rimadyl 50 mg/ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CATHETER-FEP 26G</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Surflo-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip Applicator Forceps Style</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14114-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>custodiol/HTK</td>
			<td>Dr. Franz K&#246;hler Chemie</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutasept skin disinfection</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BODL980365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrosurgical pen</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>CHANGE-A-TIP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze pads, cotton swabs</td>
			<td>Lohmann-Rauscher</td>
			<td>13353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating mat</td>
			<td>THERMO MAT PRO 30W</td>
			<td>HTP-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic sponge</td>
			<td>CuraSpon</td>
			<td>J1276A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparine-solution</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 03029820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice box</td>
			<td>PETZ</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inhalation anesthesia device</td>
			<td>GROPPLER</td>
			<td>BKGM 0616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insulation and oxygen supply device</td>
			<td>RUSKINN</td>
			<td>INVIV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Isofluran CP 1 ml/ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>metamizole</td>
			<td>WDT</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00,15000-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LEICAMZ6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope light</td>
			<td>SCHOTT</td>
			<td>KL2500LED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution (NaCl 0.9%)</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 06178437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Peha Instruments</td>
			<td>991083/4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small Petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14113-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical tape</td>
			<td>BSN</td>
			<td>4120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps - 10 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18025-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(10-0)</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>N2540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(4-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>V4940H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(7-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>1647H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (0.3 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>324826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>320801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Rompun</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

blood circuit reconstruction in an abdominal mouse heart transplantation model

التقنية الجراحية لزرع القلب البطني النظائري في الفئران هو نموذج قياسي للبحوث في علم المناعة زرع. هنا، يتم تقديم تقنية المنشأة لإعادة بناء دائرة الدم المعدلة في نموذج زرع قلب البطن غير النظائري. تستخدم هذه الطريقة الوريد الأجوف السفلي داخل الصدر (IIVC) بدلا من الشريان الرئوي للقلب المتبرع للتأق إلى الوريد الأجوف السفلي للمستلم. وهو يسهل ويحسن معدلات النجاح لزرع القلب البطني في الفئران.

هنا، يتم تقديم تقنية معدلة لزرع قلب البطن النظائري في الفئران التي تم تطويرها سابقا في مختبرنا وثبت أنها مفيدة على مدى السنوات ال 16 الماضية. سابقا, أفيد أنه في إجمالي 40 حالات الوريد كافا إلى الوريدا كافا (V-V المجموعة) مقارنة مع 40 حالات الشريان الرئوي التقليدي إلى الوريدا كافا (P-V المجموعة) إج...

Watch this Scientific Journal Video about Blood Circuit Reconstruction in an Abdominal Mouse Heart Transplantation Model at JoVE.com

Blood Circuit Reconstruction in an Abdominal Mouse Heart Transplantation Model

يتم عرض تقنية جديدة لإعادة بناء دائرة الدم في نموذج زرع قلب فأر البطن غير النظيري.

إعادة بناء دائرة الدم في نموذج زرع قلب فأر البطن

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the ...

زرع القلب في الماوس هو نموذج قيم لدراسة استجابة alloimmune هنا، ونحن نقدم تقنية جراحية جديدة لزرع قلب البطن النظائرية في الماوس. في زرع قلب الفأر التقليدي الشريان الأورطي المانحة والمتلقي الشريان الأورطي البطني هي anastomosed. الشريان الرئوي هو anastomosed إلى المتلقي السفلي الوريد كافا.في هذا زرع قلب الفأر الجديد. الشريان الأورطي المانحة هو anastomosed إلى الشريان الأورطي البطن المتلقي والمتبرع داخل الصدر السفلي الوريد كافا هو anastomosed إلى المتلقي السفلي الوريد كافا. الآن نبدأ العرض التجريبي.بعد وضع الماوس في مربع لاستنشاق isoflurane والتخدير، وزن الماوس. وفقا لوزن الماوس، لإعطاء الحقن داخل الصفاق من الكيتامين xylazine acepromacine لتخدير الماوس. إصلاح وتطهير الماوس على طاولة العملية عندما يكون التخدير قد أثر.قطع الجلد من الرقبة إلى أسفل البطن. قطع عضلات جدار البطن وإزالة الأحشاء بلطف إلى اليسار. بعد ذلك، فضح الوريدا كافا أدنى.حقن 0.4 ملليلتر من محلول الهيبارين ببطء في كافا فينا السفلى والانتظار لمدة دقيقة واحدة قبل سحب الإبرة. سحب الإبرة وقطع كل من كافا الوريد السفلي والبطن الأبهر مع مقص لتسريع exsanguination. فتح تجويف الصدر عن طريق إجراء قطع على شكل حرف u.كشف تماما القلب والرئتين، وجميع الأوعية الدموية الصدر. فضح الشريان الأورطي الصدري. قطع نصف التجويف.أدخل أنبوب الري في فتحة الشريان الأورطي الصدري. قطع الوريد الرئوي لتسهيل الري والصرف الصحي. حقن ما لا يقل عن ملليمترين من محلول HTK أربع درجات.يتوقف القلب عن النبض تماما حتى يصبح تدفق الوريد الرئوي واضحا تماما. سحب أنبوب الري وفصل القص. إزالة الغدة الصعترية.تجريد طفيفة الدهون حول القوس الأبهري. فضح وligate جذع النابض الشرياني مع خياطة صفر 10. فصل حقيقة والأنسجة الضامة تعلق على الوريد كافا السفلي intrathoracic فضح وligate كافا فينا متفوقة مع سبعة خياطة صفر وقطع عليه وراء الربط.جعل سبعة خياطة صفر حول قاعدة القلب تحت القوس الأبهري. السفلي فينا كافا وauricle على حد سواء، ثم ligate فروع الشريان الرئوي وأوعية الرئة الوريدية. عبر القوس الأبهري قدر الإمكان ولكن تأكد من أن لديك واحد تجويف واضحة دون فتحات الفروع الجانبية.الأوعية الرئة تحت الرباط وداخل الصدر السفلي الوريد كافا بالقرب من الحجاب الحاجز. الآن، أزل القلب من الصدر. ضع قلب المتبرع المخطط في محلول HDK بارد 4 درجات والحفاظ عليه مؤقتا.تأكد من عدم تمديد وقت نقص التروية الباردة أطول من 60 دقيقة. الآن، نبدأ في إظهار عملية مستقبلات. تشبه خطوات العملية الأولية تلك التي سبق عرضها للفأر المانح، بما في ذلك التخدير والتعقيم.قطع الجلد البطن بطريقة عرضية. بعد تشريح الأمعاء، قم بتغطية أعضاء البطن بالشاش الرطب باستخدام محلول ملحي. فضح كافا الوريد السفلي والبطن الشريان الأورطي وتحريرها من الأنسجة الدهنية المحيطة بها.إذا لزم الأمر، ligate أو الكهربائية الأوعية فرع الجانب تحت الأوعية الكلوية. أدخل أول ملقط الهيموستاتيكي الدقيق من اليمين في الجزء العلوي من الدماغ والأحلج تحت الأوعية الكلوية. أدخل ملقط الهيموستاتيكي الدقيق الثاني من اليمين في الجزء السفلي من الدماغ والهرطا.هناك أكثر من سنتيمتر واحد لكل من الشريان الأورطي ومساحة الوريد للتأق بين اثنين من ملقط الهيموستاتيكي. إجراء شق في الشريان الأورطي، أقرب قليلا إلى المشبك السفلي من المشبك العلوي. أيضا، يمكنك استخدام إبرة 30G لجعل حفرة صغيرة وفتحه مع مقص صغير.ضع القلب في تجويف البطن. الشريان الأورطي في الرؤية وفينا كافا على الجانب الآخر وتغطيته مع وسادة صغيرة الشاش الرطب. تكييف وغرز الشريان الأورطي المانحة إلى الشريان الأورطي المتلقي، بدءا caudally.جعل عقدة والمضي قدما مع خياطة تشغيل إلى الجزء العلوي من هذا الشق، حوالي أربع إلى خمس غرز. بعد ذلك، الوجه القلب إلى اليمين، وتغطيته مرة أخرى، ومواصلة خياطة على الجانب الأيسر حتى الوصول إلى نهاية caudal وعقدة ذلك. استخدام مقص صغير لقطع حفرة مستديرة على البطن السفلي الوريد كافا المتلقي، والتي ينبغي أن يكون لها نفس الحجم من الوريد الأجوف السفلي داخل الرحم المانحة.يجب أن يكون الشق موجودا في الجمجمة إلى التخدير الأبهري المخطط له. جعل شق الوريد أكبر من شق الأبهر. المتبرع المتدفق داخل الصدر السفلي فينا كافا.خياطة المانحة intrathoracic أدنى فينا كافا إلى المتلقي فينا كافا بدءا caudally. ربط عقدة وإجراء خياطة تشغيل حتى يتم التوصل إلى الجزء العلوي من الشق. استخدام خمس غرز ومواصلة خياطة على اليسار.وأخيرا، ربط عقدة في زاوية الذيل وتشديد بعناية. كن حذرا حتى لا تسحب بقوة. وضع أجزاء صغيرة من الاسفنج الهيموستاتيكي حول الوريد والتأق الأبهري.إزالة أولا المشابك الهيموستاتيكية الصغيرة العليا ثم شطف تجويف البطن مع كلوريد الصوديوم الدافئ 0.9٪. يسلب الإسفنج الهيموستاتيكي. مراقبة ضربات القلب المزروعة.إذا كان كل شيء على ما يحوى به، سيبدأ القلب بالانقباش مجددا. وضع الأمعاء مرة أخرى في تجويف البطن وإغلاقه مع أربعة خياطة صفر. توفير بيئة دافئة وغنية بالأوكسجين للفئران المزروعة للتعافي.في عملنا البحثي السابق، أبلغنا عن مقارنة بين إجمالي 40 حالة من الوريدا الكافا إلى الوريدا كافا مقابل 40 حالة من الشريان الرئوي التقليدي لإجراء تناهز الكافا. كان وقت العملية لتأق الأوعية في الوريدا الكافا إلى مجموعة الوريدا الكافا أقصر بكثير مقارنة بالشريان الرئوي التقليدي لمجموعة الوريدا الكافا. تمثل التقنية الجراحية لزرع قلب البطن غير النظائري في الفئران نموذجا قياسيا للأبحاث في علم المناعة في زراعة الأعضاء.هذه التقنية الجديدة لإعادة بناء دائرة الدم المعروضة هنا تسهل زرع قلب البطن في الفئران. وهذا ما يسمى المصاحبة مع انخفاض نقص التروية الدافئة وتكريس الوقت من القلب المطعمة, وبالتالي تحسين معدل نجاح هذا النموذج.

إعادة بناء دائرة الدم في نموذج زرع قلب فأر البطن

Abstract