Förfinad KLARHET-baserad vävnadsrensning för tredimensionell fibroblastorganisation i friska och skadade mushjärtan

Hjärt-kärlsjukdom är den vanligaste dödsorsaken i världen och kännetecknas ofta av förhöjd hjärtfibros som kan leda till ökad ventrikulär styvhet med förändrad hjärtfunktion. Denna ökning av hjärt ventrikulär fibros beror på aktivering av bosatta fibroblaster, även om hur dessa celler fungerar inom det 3-dimensionella (3D) hjärtat, vid baslinjen eller efter aktivering, är inte väl förstådd. För att undersöka hur fibroblaster bidrar till hjärtsjukdomar och deras dynamik i 3D-hjärtat utvecklades en förfinad CLARITY-baserad vävnadsrensnings- och bildbehandlingsmetod som visar fluorescerande märkta hjärtfibroblaster i hela mushjärtat. Vävnad bosatta fibroblaster var genetiskt märkta med Rosa26-loxP-eGFP florescent reporter möss korsade med hjärt fibroblast uttrycker Tcf21-MerCreMer knock-in linje. Denna teknik användes för att observera fibroblast lokalisering dynamik i hela vuxna vänstra ventrikel i friska möss och i fibrotic mus modeller av hjärtsjukdomar. Intressant nog, i en skademodell, observerades unika mönster av hjärt fibroblaster i det skadade mushjärtat som följde band av inslagna fibrer i kontraktil riktning. I ischemiska skademodeller inträffade fibroblast död, följt av återpopulation från den infarkt gränszonen. Sammantaget möjliggör denna raffinerade hjärtvävnad klargörande teknik och digitaliserade bildframställning system 3D visualisering av hjärt fibroblaster i hjärtat utan begränsningar av antikroppar penetration misslyckande eller tidigare problem kring förlorade fluorescens på grund av vävnad bearbetning.