Tek Hücreli Dizilerin Canlı Hücre Görüntülemesi (LISCA) - Hücresel Kinetiği Ölçmek için Çok Yönlü Bir Teknik

Tek Hücreli Dizilerin Canlı Hücre Görüntülemesi (LISCA), yüksek verimdeki tek tek hücrelerden floresan sinyallerinin zaman akışlarını toplamak için çok yönlü bir yöntemdir. Genel olarak, kültürlü hücrelerden tek hücreli zaman kurslarının kazanılması hücre hareketliliği ve hücre şekillerinin çeşitliliği ile engellenir. Yapışkan mikro diziler tek hücreli koşulları standartlaştırır ve görüntü analizini kolaylaştırır. LISCA, tek hücreli mikroarrayları tarama zaman atlamalı mikroskopi ve otomatik görüntü işleme ile birleştirir. Burada, tek hücreli floresan zamanı derslerini LISCA formatında almanın deneysel adımlarını açıklıyoruz. Gelişmiş yeşil floresan protein (eGFP) için mRNA kodlaması kullanarak mikropatterned bir diziye yapışan hücreleri transfect ediyoruz ve tarama zaman atlamalı mikroskopi ile paralel olarak yüzlerce hücrenin eGFP ekspresyon kinetiğini izliyoruz. Görüntü veri yığınları, tek hücreli floresan süresi kursları oluşturmak için floresan yoğunluğunu seçilen hücre konturları üzerinde entegre eden yeni geliştirilen yazılım tarafından otomatik olarak işlenir. mRNA transfection sonrası eGFP ifade süresi derslerinin, mRNA'nın ifade ve bozulma oranlarını ortaya koyan basit bir kinetik çeviri modeli ile iyi tanımlandığını gösteriyoruz. Lisca'nın sinyal kesme apoptoz bağlamında birden fazla belirtecin olay süresi korelasyonları için daha fazla uygulaması tartışılmıştır.