Imaging live ad alta produttività di microcolonie per misurare l'eterogeneità nella crescita e nell'espressione genica

Misurazioni precise dell'eterogeneità tra e all'interno dello sforzo nei tassi di crescita microbica sono essenziali per comprendere gli input genetici e ambientali nella tolleranza allo stress, nella patogenicità e in altri componenti chiave dell'idoneità. Questo manoscritto descrive un saggio basato sul microscopio che tiene traccia di circa 10⁵ microcoloni Saccharomyces cerevisiae per esperimento. Dopo l'imaging automatizzato time-lapse del lievito immobilizzato in una piastra multiwell, i tassi di crescita dei microcoloni vengono facilmente analizzati con un software di analisi delle immagini personalizzato. Per ogni microcolonia, è anche possibile monitorare l'espressione e la localizzazione di proteine fluorescenti e la sopravvivenza dello stress acuto. Questo saggio consente una stima precisa dei tassi di crescita medi dei ceppi, nonché una misurazione completa dell'eterogeneità nella crescita, nell'espressione genica e nella tolleranza allo stress all'interno delle popolazioni clonali.